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小鼠雜交瘤細胞;GSTP1培養

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所  在  地上海

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更新時間:2017-02-04 13:22:32瀏覽次數:170次

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產品簡介

小鼠雜交瘤細胞;GSTP1培養細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

產品名稱小鼠雜交瘤細胞;GSTP1培養
貨期3-5天
發貨地上海

細胞名稱  小鼠雜交瘤細胞;GSTP1培養
形態特性   淋巴母細胞樣
生長特性  半貼壁生長
特征特性   該雜交瘤細胞由湖南遠泰生物技術有限公司制備并提交,細胞注射小鼠腹腔可產生高滴度的單抗,可用于基礎研究和臨床檢驗。 
培養條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況  
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  陰性
STR  
同工酶  同工酶鑒定
染色體  
使用權限  A類

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療
真珠草Phyllanthus urinaria    3',5,5',7-Tetrahydroxy-4',6-dimethoxyflavone    3',5,5',7-四羥基-4',6-二甲氧基黃酮    125537-92-0    C17H14O8    ≥95%
赤靈芝Ganoderma lucidum    3,5,9-Trihydroxyergosta-7,22-dien-6-one    3,5,9-三羥基麥角甾-7,22-二烯-6-酮    88191-14-4    C28H44O4    ≥95%
鉤藤Uncaria sessilifructus    3,6,19,23-Tetrahydroxy-12-ursen-28-oic acid    3,6,19,23-四羥基-12-熊果-28-酸    91095-51-1    C30H48O6    ≥97%
鉤藤Uncaria sessilifructus    3,6,19-Trihydroxy-23-oxo-12-ursen-28-oic acid    3,6,19-三羥基-23-氧代-12-烏蘇烯-28-酸    131984-82-2    C30H46O6    ≥95%
割舌樹Walsura robusta    3,7,16-Trihydroxystigmast-5-ene    none    289056-24-2    C29H50O3    ≥95%
水紅木Viburnum cylindricum    4',9,9'-Trihydroxy-3'-methoxy- 3,7'-epoxy-4,8'-oxyneolignan    none    144881-21-0    C19H22O6    ≥95%
光葉巴豆Croton laevigatus    5,6,7,8-Tetramethoxycoumarin    5,6,7,8-四甲氧基香豆素    56317-15-8    C13H14O6    ≥95%
印度苦楝樹Azadirachta indica    5,7,3'-Trihydroxy-4'-methoxy-8-prenylflavanone    5,7,3'-三羥基-4'-甲氧基-8-異戊烯基黃烷酮    1268140-15-3    C21H22O6    ≥98%
大黃梔子Gardenia sootepensis    5,7,3'-Trihydroxy-6,4',5'-trimethoxyflavanone    5,7,3'-三羥基-6,4',5'-*氧基黃烷酮    310888-07-4    C18H18O8    ≥98%
車桑子Dodonaea viscosa    5,7,4'-Trihydroxy-3,6-dimethoxy -3',5'-diprenylflavone    5,7,4'-三羥基-3,6-二甲氧基-3',5'-二異戊烯基黃酮    1246926-08-8    C27H30O7    ≥95%
車桑子Dodonaea viscosa    5,7,4'-Trihydroxy-3,6-dimethoxy-3'-prenylflavone    5,7-二羥基-2-[4-羥基-3-(3-甲基-2-丁烯-1-基)苯基]-3,6-二甲氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮    959421-20-6    C22H22O7    ≥95%NPIP-like protein 1    NPIP樣蛋白1抗體
Nicastrin    老年癡呆蛋白APH2抗體
NARC1    神經細胞凋亡調節轉化蛋白1抗體(前蛋白轉化酶枯草溶菌素9)
NPFF1 Receptor    G蛋白偶聯受體147抗體
Nur77    孤兒核受體蛋白Nur77抗體
Phospho-Nur77(Ser351)    磷酸化孤兒核受體蛋白Nur77抗體
NAIF1 protein    核凋亡誘導因子蛋白1
NMDAR2C    *受體2C抗體
TrkB    *激酶B抗體
NADPH oxidase 4    NADPH氧化酶4抗體
NDE1    核分布基因E同源蛋白1抗體

 

 


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