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抗鼠CD8單克隆細胞;YTS 169.4.2.1培養

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所  在  地上海

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更新時間:2017-02-04 13:44:27瀏覽次數:145次

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產品簡介

抗鼠CD8單克隆細胞;YTS 169.4.2.1培養細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療

細胞名稱  抗鼠CD8單克隆細胞;YTS 169.4.2.1培養
形態特性   淋巴母細胞樣
生長特性  半貼壁生長
特征特性   該細胞分佖CD8不同抗原決定簇單抗,用于CD8單抗的制備。 
培養條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況  C10
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  陰性
STR   STR鑒定
同工酶  
染色體  
使用權限  A類

產品名稱抗鼠CD8單克隆細胞;YTS 169.4.2.1培養
貨期3-5天
發貨地上海

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
紫堇Cordalis bungeana Turez.    Corynoline    紫堇靈    18797-79-0    C21H21NO5    ≥98%
紫金牛科的百兩金 Crispaeaf Ardisia Root    Ardisiacrispin A    百兩金素A    23643-61-0    C52H84O22    ≥98%
紫花魚燈草Corydalis incisa    Bulbocapnine    球紫堇堿    298-45-3    C19H19NO4    ≥98%
紫花前胡Peucedani Decursivi Radix    Nodakenin    紫花前胡苷    495-31-8    C20H24O9    ≥98%
紫草Radix Arnebiae    Propionylshikonin    丙酰紫草素    162283-70-7    C19H20O6    ≥98%
梓Catalpa ovata    Deoxylapachol    去氧拉巴醌    3568-90-9    C15H14O2    ≥95%
梓Catalpa ovata    1-Hydroxy-2-prenylnaphthalene    2-異戊烯基-1-萘酚    16274-34-3    C15H16O    ≥95%
梓Catalpa ovata    3-Hydroxycatalponol    3-羥基梓酚    265644-24-4    C15H18O3    ≥95%
梓Catalpa ovata    9-Hydroxy-alpha-lapachone    9-羥基-ALPHA-拉杷醌    22333-58-0    C15H14O4    ≥95%
梓Catalpa ovata    9-Methoxy-α-lapachone    9-甲氧基-ALPHA-拉帕醌    35241-80-6    C16H16O4    ≥95%
梓Catalpa ovata    Lapachol    黃鐘花醌    84-79-7    C15H14O3    ≥98%OAS3    2'-5'-寡腺苷酸合成酶3抗體
OSR2    牙齒發育相關蛋白Osr2抗體
Oct-4B(OCT4B-190)NT    胚胎干細胞關鍵蛋白190抗體(N端)
ORC1L    起始識別復合蛋白亞基1抗體
OTUB    泛素特異蛋白酶Otubain2抗體
Oligophrenin 1    精神發育遲滯相關蛋白Oligophrenin-1抗體
OGFOD2    末端多聚腺苷酸2蛋白抗體
ORAV1    口腔癌高表達的蛋白1抗體
ORP4    氧化固醇結合蛋白4抗體
OLFM4    抗細胞凋亡蛋白OLFM44抗體
OCC1    結腸癌過度表達蛋白1抗體
OCIAD2    卵巢癌免疫反應抗原抗體
OVCA1    卵巢癌相關基因1抗體

 

 


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