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小鼠雜交瘤細胞;AFB20084F12培養

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所  在  地上海

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更新時間:2017-02-07 10:16:20瀏覽次數:183次

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產品簡介

小鼠雜交瘤細胞;AFB20084F12培養細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

產品名稱小鼠雜交瘤細胞;AFB20084F12培養
貨期3-5天
發貨地上海

細胞名稱  小鼠雜交瘤細胞;AFB20084F12培養
形態特性   淋巴母細胞樣
生長特性  半貼壁生長
特征特性   該細胞屬保藏,其特征特性尚未公開。 
培養條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況  C2
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  陰性
STR  
同工酶  
染色體  
使用權限  未定

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療
黃花蒿 Artemisia annua L.    Dihydroartemisinin    雙氫    71939-50-9    C15H24O5    ≥98%
小檗Berberis thunbergii DC.    Dihydroberberine    二氫小檗堿    483-15-8    C20H19NO4    ≥98%
辣椒屬 Capsicum frutescens L.    Dihydrocapsaicin    二氫辣椒素    19408-84-5    C18H29NO3    ≥98%
     Dihydrocapsiate    二氫辣椒素酯    205687-03-2    C18H28O4    ≥95%
兩面針Zanthoxylum nitidum    Dihydrochelerythrine    二氫白屈菜紅堿    6880-91-7    C21H19NO4    ≥95%
吳茱萸Evodia rutaecarpa    Dihydrocitflavanone    (S)-2,3,9,10-四氫-5-羥基-2-(4-羥基苯基)-8,8-二甲基-4H,8H-苯并[1,2-B:3,4-B']二吡喃-4-酮    70897-14-2    C20H20O5    ≥96%
云南紅豆杉Taxus yunnanensis    Dihydroconiferyl alcohol    二氫松柏醇    2305-13-7    C10H14O3    ≥95%
云南松Pinus yunnanensis    Dihydrodehydrodiconiferyl alcohol    二氫去氫二愈創木基醇    28199-69-1    C20H24O6    ≥90%
千金藤Stephania japonica    Dihydroepistephamiersine 6-acetate    6-乙?;浔砬Ы鹛倌菈A    57361-74-7    C23H31NO7    ≥95%
紅藤Sargentodoxa cuneata    Dihydroguaiaretic acid    二氫愈創木脂酸    66322-34-7    C20H26O4    ≥98%hypothetical protein (LOC55652)    hypothetical protein 抗原
histone H3-like protein    組蛋白H3樣蛋白(N端多肽)
HIV-1(human immunodeficiency virus type 1)    艾滋病病毒-1/人類免疫缺陷病毒1型(抗原)
HIV-1(human immunodeficiency virus type 1)    艾滋病病毒-1/人類免疫缺陷病毒1型(抗原)
Measles virus protein(Plant2 derived measles virus hemagglutinin protein)    麻疹病毒紅血球凝集素蛋白多肽
Measles virus protein(Plant2 derived measles virus hemagglutinin protein)    麻疹病毒紅血球凝集素蛋白多肽
HSL(hormone-sensitive lipase)    荷爾蒙敏感脂肪酸(抗原)
HSP-27(Heat Shock Protein 27)    熱休克蛋白-27(抗原)
HSP-90Alpha(Heat Shock Protein 90Alpha )    熱休克蛋白90α(抗原)
HSP-90 Beta (heat sock protein-90 Beta)    熱休克蛋白-90β (抗原)
IASPP(inhibitory member of the ASPP family)    腫瘤細胞凋亡ASPP家族的另一個成員(抗原)

 

 


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