【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 雜交瘤細胞;4.00E+10使用說明書
形態特性 淋巴母細胞樣
生長特性 半貼壁生長
特征特性 該細胞屬保藏,其特征特性尚未公開。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C3
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權限 未定
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
華山松Pinus armandii Dihydropinosylvin methyl ether 二氫銀松素甲醚 17635-59-5 C15H16O2 ≥95%
臭常山Orixa japonica Dihydroresveratrol 二氫白藜蘆醇 58436-28-5 C14H14O3 ≥96%
臭常山Orixa japonica Dihydroresveratrol 3-O-glucoside 二氫白藜蘆醇 3-O-葡萄糖甙 100432-87-9 C20H24O8 ≥98%
國槐Sophora japonica Dihydrorobinetin 刺槐亭 4382-33-6 C15H12O7 ≥95%
丹參 Salvia miltiorrhiza Bge. Dihydrotanshinone I 二氫丹參酮 I 87205-99-0 C18H14O3 ≥98%
麻風樹Jatropha curcas Dimeric coniferyl acetate 乙酸二聚松柏酯 184046-40-0 C24H26O8 ≥95%
紅椿Toona ciliate Dimethyl phthalate 鄰苯二甲酸二甲酯, 避蚊酯 131-11-3 C10H10O4 ≥95%
白蠟Fraxinus chinensis Roxb. Dimethylfraxetin 白蠟樹素 6035-49-0 C12H12O5 ≥98%
金錢松Pseudolarix kaempferi Dimethylmatairesinol 甲基牛蒡酚; 甲基牛蒡子素 25488-59-9 C22H26O6 ≥98.5%
黃藥子Dioscorea bulbifera Linn. Diosbulbin B 黃獨素B 20086-06-0 C19H20O6 ≥98%
黃獨Dioscorea bulbifera Diosbulbin C 黃獨素 C,黃藥子素 C 20086-07-1 C19H22O7 ≥98.5%Lumbrokinase 蚯蚓纖溶酶(*抗原)
Livin (Inhibitors of apoptosis proterins Livin) 一種新的凋亡抑制蛋白(抗原)
p38 MAPK/MKK3/MAPKK14 絲裂原活化蛋白激酶p38(抗原)
Metal ion transporter 擬南介金屬離子轉運蛋白(抗原)
MADCAM-1 黏膜選址素(抗原)
MAG-a/b (Myelin associated glycoprotein; L / S -MAG;) 髓鞘相關糖蛋白a/b(抗原)
MAG (Myelin associated glycoprotein; L-MAG;MAG-a ) 髓鞘相關糖蛋白(抗原)