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小鼠雜交瘤細胞；AFG20081C8使用說明書

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更新時間：2017-02-07 10:22:09瀏覽次數(shù)：138次

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產(chǎn)品簡介

小鼠雜交瘤細胞；AFG20081C8使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細介紹

產(chǎn)品名稱	小鼠雜交瘤細胞；AFG20081C8使用說明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細胞名稱 小鼠雜交瘤細胞；AFG20081C8使用說明書
形態(tài)特性   淋巴母細胞樣
生長特性半貼壁生長
特征特性   該細胞屬保藏，其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限未定

復(fù)蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
馬桑Coriaria nepalensis   Ducheside A   蛇莓甙A   176665-78-4   C20H16O12   ≥98%
衛(wèi)矛科植物毛脈衛(wèi)矛 Euonymus的帶翅莖枝或根   Dulcitol   衛(wèi)矛醇   608-66-2   C6H14O6   ≥98%
紅花八角Illicium micranthum Dun   Dunnianol   紅花八角醇   139726-29-7   C27H26O3   ≥98%
金露花Duranta repens   Durantoside I   none   53526-67-3   C26H32O13   ≥97%
金露花Duranta repens   Durantoside II   none   53526-66-2   C27H34O14   ≥95%
海芒果Cerbera manghas   ent-11,15-Dihydroxykaur-16-en-19-oic acid   11,15-二羥基-16-貝殼杉烯-19-酸   57719-76-3   C20H30O4   ≥95%
蒼耳Xanthium sibiricum   ent-16β,17-Dihydroxykauran-19-oic acid   等效-16beta,17-二羥基-19-異貝殼杉烷酸   3301-61-9   C20H32O4   ≥98%
紫草 Arnebia Root   β,β-Dimethylacrylshikonin   β,β-二甲基丙烯酰紫草素   24502-79-2   C21H22O6   ≥98%PG(Osteoprotegerin)   護骨素(多肽抗原)
OPGL (Osteoprotegerin ligand)   骨保護蛋白配體(抗原)
P311 protein   增生瘢痕相關(guān)蛋白（抗原）
PARP(poly ADP-ribose polymerase)   多腺苷二磷酸多聚酶抗原
Visfatin-1 (PBEF1)(NT) Human   內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素（人：N端多肽）、內(nèi)臟脂肪素、又稱：前B細胞克隆增強因子、內(nèi)肥素、腹脂素
Visfatin-1 (PBEF1)(NT)    內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素
PBEF (CT)   內(nèi)脂素/B細胞克隆增強因子
PEDF (pigment epithelium-derived factor)   色素上皮源因子(多肽抗原）
PAP2c (Phosphatidic acid phosphatase 2c)   磷脂酸磷酸酶2C（抗原）
PEPT1 (Peptide-transporters 1)   腸道肽轉(zhuǎn)運蛋白(小肽轉(zhuǎn)運蛋白)多肽
PTEN/MMAC1   一種腫瘤抑制基因抗原
PIBF(progesterone induced blocking factor)   孕激素誘導(dǎo)阻斷因子(抗原)