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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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產(chǎn)品型號
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所 在 地上海市
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更新時(shí)間:2017-02-08 09:01:14瀏覽次數(shù):113次
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雜交瘤細(xì)胞;JEV/4D1C使用說明書細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基,這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一,周三,周五更換培養(yǎng)基。
產(chǎn)品名稱 | 雜交瘤細(xì)胞;JEV/4D1C使用說明書 |
貨期 | 3-5天 |
發(fā)貨地 | 上海 |
細(xì)胞名稱 雜交瘤細(xì)胞;JEV/4D1C使用說明書
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
生長特性 半貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞屬保藏,其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
復(fù)蘇操作要點(diǎn):
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
潺槁木姜子Litsea glutinosa Reticuline 牛心果鹼 485-19-8 C19H23NO4 ≥97%
云南含笑Michelia yunnanensis Reynosin 喘諾木烯內(nèi)酯 28254-53-7 C15H20O3 Unstable
羽葉白頭樹Garuga pinnata Reynoutrin 槲皮素-3-D-木糖甙 549-32-6 C20H18O11 ≥95%
扁莖黃芪Astragalus complanatus. Rhamnocitrin 3,4'-O-di-β- D-glucopyranoside 沙苑苷A C43H70O15 ≥98%
蓼科植物掌葉大黃 Rheum palmatum L. Rhaponticin 土大黃苷 155-58-8 C21H24O9 ≥98%
菊科植物藍(lán)刺頭Echinops Latifolius Tausch 或華東藍(lán)刺頭Echinops grijisii Hance的干燥根 Rhapontisterone B 漏蘆甾酮B 698975-64-3 C27H44O7 ≥98%
大黃 Rheum palmatum L. Rhein 大黃酸 478-43-3 C15H8O6 ≥98%
蓼科植物掌葉大黃 Rheum palmatum L. Rhein-8-O-beta-D-glucopyranoside 大黃酸-8-O-β-D- 葡萄糖苷 113443-70-2 C21H16CaO11 ≥98%
地黃 Rehmannia glutinosa Libosch. RhMannioside D 地黃苷D 81720-08-3 C27H42O20 ≥98%小鼠整合素α-IIb(Itga2b/CD41)ELISA Kit ,英文名: Mouse Integrin alpha-IIb,Itga2b/CD41 ELISA Kit ,規(guī)格: 48T/96T
小鼠整合素α5(Itgax/CD11c)ELISA Kit ,英文名: Mouse Integrin alpha-X,Itgax/CD11c ELISA Kit ,規(guī)格: 48T/96T
小鼠粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISA Kit ,英文名: Mouse Mucin-7,MUC7 ELISA Kit ,規(guī)格: 48T/96T
小鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISA Kit ,英文名: Mouse mucin-5 subtype B,MUC5B ELISA Kit ,規(guī)格: 48T/96T
小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC) ELISA Kit ,英文名: Mouse Mucin-5 subtype AC,MUC5AC ELISA Kit ,規(guī)格: 48T/96T
小鼠粘蛋白/粘液素2(MUC2)ELISA Kit ,英文名: Mouse Mucin-2,MUC2 ELISA Kit ,規(guī)格: 48T/96T
小鼠粘蛋白/粘液素1(MUC1)ELISA Kit ,英文名: Mouse Mucin-1,MUC1 ELISA Kit ,規(guī)格: 48T/96T
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