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上海撫生實業有限公司
小鼠雜交瘤細胞株;4G7A9培養細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。
產品名稱 | 小鼠雜交瘤細胞株;4G7A9培養 |
貨期 | 3-5天 |
發貨地 | 上海 |
細胞名稱 小鼠雜交瘤細胞株;4G7A9培養
形態特性 淋巴母細胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細胞屬保藏,其特征特性尚未公開。
培養條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權限 未定
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
異* Isotretinoin 4759-48-2
異舒普林鹽酸鹽 Isoxsuprine Hydrochloride 579-56-6
*相關物質A Ketoprofen Related CoMpound A (AS);alpha-Methyl-3-(4-Methylbenzoyl) benzeneacetic acid 107257-20-5
*相關物質C Ketoprofen Related CoMpound C;2-(3-carboxyphenyl)propionic acid 68432-95-1
*相關物質D Ketoprofen Related CoMpound D;3-acetylbenzophenone 66067-44-5
酮咯酸* Ketorolac TroMethaMine 74103-07-4
*相關物質A LevetiracetaM Related CoMpound A;(S)-N-(1-aMi-oxobutan-2-yl)-4-chlorobut* 102767-31-7
*相關物質B LevetiracetaM Related CoMpound B;(S)-2-aMinobut* hydrochloride 7682-20-4
*相關物質A Levocarnitine Related CoMpound A;3-carboxy-N,N,N-triMethyl-2-propen-1-aMiniuM chloride 6538-82-5小鼠內分泌腺來源的血管內皮生長因子(EG-VEGF)ELISA Kit ,英文名: Mouse Endocrine gland vascular endothelial growth factor,EG-VEGF ELISA Kit ,規格: 48T/96T
小鼠可溶性Toll樣受體9(sTLR9/sCD289)ELISA Kit ,英文名: Mouse Soluble Toll-like Receptor 9,sTLR9/sCD289 ELISA Kit ,規格: 48T/96T
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小鼠可溶性Toll樣受體2(sTLR2)ELISA Kit ,英文名: Mouse Soluble Toll-like Receptor 2,sTLR2 ELISA Kit ,規格: 48T/96T
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