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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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所 在 地上海市
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更新時(shí)間:2017-02-09 10:43:19瀏覽次數(shù):123次
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產(chǎn)品名稱 | 生長(zhǎng)特性 | 發(fā)貨地 | 貨期 |
雜交瘤細(xì)胞株;2-2特性 | 懸浮生長(zhǎng) | 上海 | 3-5天 |
細(xì)胞名稱
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞屬保藏,其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量*,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,加入適量*,使*的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去*,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,終止*作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
乙酸纖維素 shēng huà shì jì 容量: 100毫克
乙二胺四乙酸二鈉鎂鹽四水物 shēng huà shì jì 容量: 2~8℃ 1毫克
乙二胺四乙酸二鈉鎂鹽 shēng huà shì jì 容量: 2~8℃ 100毫克
乙二胺四乙酸二鈉鈣鹽 shēng huà shì jì 容量: 1克
乙二胺四乙酸二鉀鹽 shēng huà shì jì 容量: 保存:-20℃ 5毫克
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移液器吸頭 shēng huà shì jì 容量: 2~8℃ 25U
移液器P5000 shēng huà shì jì 容量: RT,避光 100克
移液器P50 shēng huà shì jì 容量: 1克貓α干擾素(IFN-α)ELISA Kit ,英文名: Cat Interferon α,IFN-α ELISA Kit ,規(guī)格: 48T/96T
雞α干擾素(IFN-α)ELISA Kit ,英文名: Chicken Interferon α,IFN-α ELISA Kit ,規(guī)格: 48T/96T
雞HSP60抗體(IgG)ELISA Kit ,英文名: Chicken Hsp60antibody IgG ELISA kit ,規(guī)格: 48T/96T
雞HSP27抗體(IgG)ELISA ki ,英文名: Chicken Hsp27antibody IgG ELISA kit ,規(guī)格: 48T/96T
雞HSP27 IgM 抗體ELISA Kit ,英文名: Chicken Hsp27 IgM antibody ELISA kit ,規(guī)格: 48T/96T
雞G0/G1期開關(guān)基因(G0S2)ELISA Kit ,英文名: Chicken G0/G1 switch gene 2,G0S2 ELISA Kit ,規(guī)格: 48T/96T
雞FAM172A蛋白(FAM172A)ELISA Kit ,英文名: Chicken Protein FAM172A,FAM172A ELISA kit ,規(guī)格: 48T/96T
雞C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA Kit ,英文名: Chicken C-Reactive Protein,CRP ELISA Kit ,規(guī)格: 48T/96T
雞CD8分(CD8)ELISA Kit ,英文名: Chicken Cluster of differentiation 8,CD8 ELISA Kit ,規(guī)格: 48T/96T
雞CD4分(CD4)ELISA Kit ,英文名: Chicken Cluster of Differentiation 4,CD4 ELISA Kit ,規(guī)格: 48T/96T
雞CD3分(CD3)ELISA Kit ,英文名: Chicken Cluster of differentiation 3,CD3 ELISA Kit ,規(guī)格: 48T/96T
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