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雜交瘤細胞株；4C9使用說明書

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更新時間：2017-02-10 08:50:58瀏覽次數(shù)：142次

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產(chǎn)品簡介

雜交瘤細胞株；4C9使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細介紹

產(chǎn)品名稱	雜交瘤細胞株；4C9使用說明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細胞名稱 雜交瘤細胞株；4C9使用說明書
形態(tài)特性   淋巴母細胞樣
生長特性懸浮生長
特征特性   該細胞屬保藏，其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限未定

復(fù)蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
寡霉素   shēng huà shì jì   容量：       1公斤
寡聚脫氧胸苷纖維素   shēng huà shì jì   容量：       10克
固紫醬GBC鹽   shēng huà shì jì   容量：       250ku
固體改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基   shēng huà shì jì   容量：       40克
固綠FCF   shēng huà shì jì   容量：       1公斤
固藍RR鹽   shēng huà shì jì   容量：       5毫克
固藍B鹽   shēng huà shì jì   容量：       1公斤
固藍BB鹽   shēng huà shì jì   容量：   保存：-20℃   2毫克
固紅片劑   shēng huà shì jì   容量：       25克
固紅TR   shēng huà shì jì   容量：       5克
固紅RC   shēng huà shì jì   容量：       100克小鼠內(nèi)臟脂肪特異性*蛋白酶抑制劑(vaspin)免疫試劑盒   Mouse Visceral adipose-specific serine protease inhibitor,vaspin ELISA Kit
小鼠內(nèi)皮脂肪酶(EL)免疫試劑盒   Mouse Endothelial lipase,EL ELISA Kit
小鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)免疫試劑盒   Mouse Endothelial nitric oxide synthase 3,eNOS-3 ELISA Kit
小鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)免疫試劑盒   Mouse Endothelial nitric oxide synthase,eNOS ELISA Kit
小鼠內(nèi)皮素1(ET-1)免疫試劑盒   Mouse Endothelin 1,ET-1 ELISA Kit
小鼠內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長因(EG-VEGF)免疫試劑盒   Mouse Endocrine gland vascular endothelial growth factor,EG-VEGF ELISA Kit
小鼠末端補體復(fù)合物C5b-9(TCC C5b-9)免疫試劑盒   Mouse terminal complement complex C5b-9,TCC C5b-9 ELISA Kit
小鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)免疫試劑盒   Mouse annexin Ⅴ,ANX-Ⅴ ELISA Kit
小鼠繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激素(AMH)免疫試劑盒   Mouse anti-Mullerian hormone,AMH ELISA kit