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上海撫生實業有限公司
大鼠肝細胞瘤;H-4-II-E培養細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
產品名稱 | 大鼠肝細胞瘤;H-4-II-E培養 |
貨期 | 3-5天 |
發貨地 | 上海 |
細胞名稱 大鼠肝細胞瘤;H-4-II-E培養
形態特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 可誘導產生芳烴羥化酶,用于檢測環境樣品或食物提取物中皮克級的多氯聯苯有機化合物。
培養條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS;1%NEAA
傳代方法 1:2~1:4傳代;2~3天換液1次。
傳代情況 C3
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR -
同工酶
染色體 44~56
使用權限 A類
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
人磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)免疫試劑盒 Human phosphoenolpyruvate carboxykinase,PCK ELISA Kit
人磷酸烯醇丙酮酸羧激酶,線粒體(PCK2)免疫試劑盒 Human PCK2 ELISA Kit
人磷酸葡萄糖酸脫氫酶(PGD)免疫試劑盒 Human phosphogluconate dehydrogenase,PGD ELISA kit
人磷酸酶PP2A癌性抑制物(CIP2A)免疫試劑盒 Human cancerous inhibitor of PP2A,CIP2A ELISA Kit
人磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)免疫試劑盒 Human phospho Protein Kinase C,P-PKC ELISA Kit
人磷酸化蛋白激酶B(P-PKB)免疫試劑盒 Human phosphorylated protein kinase B,P-PKB ELISA kit
人淋巴細胞趨化因(Lptn/LTN/XCL1)免疫試劑盒 Human lymphotactin ELISA Kit
人淋巴細胞抗原6復合物基因座A(Ly6a)免疫試劑盒 human lymphocyte antigen 6 complex locus A,Ly6a ELISA Kit-磷酸葡糖酸鋇鹽(-20℃) NA
6-氯-1-己醇 97% 6-Chlorohexanol 2009-83-8
6-氯-1-羥基苯并三氮唑 (Cl-HOBt) (2-8℃) 6-Chloro-1-hydroxibenzotriazol 26198-19-6
6-氯-7-脫氮嘌呤 4-Chloropyrrolo[2,3-d]pyrimidine 3680-69-1
6-羥基* 2-Hydroxy-5-pyridinecarboxylic acid 5006-66-6
6-硝基苯并咪唑 5-Nitrobenzimidazole 94-52-0
8-氮*(-20℃) 8-AZAGUANINE 134-58-7
8-羥基喹啉銅鹽 OXINE-COPPER 13014-03-4
8-羥基喹哪啶 8-Hydroxyquinaldine 826-81-3
9,10-二氫-9-氧-10-氧雜磷菲 NA
氯甲酸-9-芴甲酯(+4℃) 9-Fluorenylmethyl chloroformate 28920-43-6
9-芴甲基-N-琥珀酰亞胺基碳酸酯 N-(9-Fluorenylmethoxycarbonyloxy)succinimide 82911-69-1
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