細胞名稱 大鼠肝細胞;IAR20使用說明書
形態特性 圓形、多角
生長特性 貼壁生長
特征特性
培養條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 20%FBS
傳代方法 1:3傳代;3~4天1次。
傳代情況 C5
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR -
同工酶
染色體 36~46
使用權限 A類
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
Boc-L-脯氨醇 (S)-(-)-1-Boc-2-pyrrolidinemethanol 69610-40-8
明膠;白明膠;動物膠;筋膠;銀明膠 Gelatin;Puragel 9000-70-8
β-*(+4°C) BETA-AMYLASE 9000-91-3
β-甘油磷酸二鈉鹽五水 BETA-GLYCEROL PHOSPHATE DISODIUM SALT 13408-09-8
B-葡聚糖 2-8℃ beta-D-Glucan 9041-22-9
Cetrimide瓊脂基礎 NA
六羰基鉻 ChroMiuM hexacarbonyl 13007-92-6
Cl(-)型離子交換樹脂 NA
D-(-)-赤蘚糖 D-(-)-ERYTHROSE 583-50-6
錫 Tin 87-69-4
D-(-)-阿拉伯糖 beta-D-(-)-Arabinose 10323-20-3人粒細胞巨噬細胞集落刺激因抗體(GM-CSF Ab)免疫試劑盒 Human anti-Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor antibody,GM-CSF Ab ELISA Kit
人粒細胞巨噬細胞集落刺激因(GM-CSF)免疫試劑盒 Human GM-CSF ELISA Kit
人粒細胞集落刺激因(G-CSF)免疫試劑盒 Human G-CSF ELISA Kit
人粒細胞集落刺激因(CSF3)抗體免疫試劑盒 Human granulocyte colony-stimulating factor(CSF3)antibody ELISA kit
人利什曼原蟲(Leishmania)抗體(IgG)免疫試劑盒 Human Leishmania antibody IgG ELISA Kit
人利鉀尿肽(KP)免疫試劑盒 Human kaliuretic peptide,KP ELISA Kit
人李斯特菌抗體(IgM)免疫試劑盒 Human Listeria antibody,IgM ELISA Kit
人李斯特菌抗體(IgG)免疫試劑盒 Human Listeria antibody IgG ELISA Kit
人冷誘導RNA結合蛋白(CIRBP)免疫試劑盒 Human CIRBP ELISA Kit
人冷球蛋白(CG)免疫試劑盒 Human Cryoglobulin,CG ELISA Kit