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大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞;RBL-1使用說明書

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所  在  地上海市

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更新時間:2017-02-13 08:44:17瀏覽次數:362次

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產品簡介

大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞;RBL-1使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療

產品名稱大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞;RBL-1使用說明書
貨期3-5天
發貨地上海

細胞名稱  大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞;RBL-1使用說明書
形態特性   淋巴母細胞樣
生長特性  懸浮生長
特征特性   該細胞表現出多種嗜堿性粒細胞的分化特征:釋放組胺,表達IgE的Fc受體。 
培養條件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法   維持細胞濃度在0.1~1×105 cells/ml;2~3天換液1次。
傳代情況  C3
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  培養法(-)
STR   -
同工酶  
染色體  
使用權限  A類

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
D-*    D-Proline;(R)-Pyrrolidine-2-carboxylic acid;(R)-(+)-Proline;D-Pro    344-25-2
D-果糖-1,6-二磷酸三鈉(2-8℃)    D-Fructose-1,6-diphosphate trisodium salt octahydrate    81028-91-3
D-果糖-6-磷酸二鈉(-20℃)    D-FRUCTOSE 6-PHOSPHATE DISODIUM SALT    26177-86-6
D(-)核糖(+4℃)    D-Ribose    50-69-1
D-環戊基*    D-Cyclopentylglycine    2521-86-0
D-甲硫氨基酸    D-Methionine    348-67-4
D-來蘇糖    D-LYXOSE    1114-34-7
D-賴氨酸鹽酸鹽    D-Lysine hydrochloride    7274-88-6
D-木酮糖.(2-8℃) 95%    D-XYLULOSE    551-84-8人克拉拉細胞蛋白(CC16)免疫試劑盒    Human CC16 ELISA Kit
人可溶性轉鐵蛋白受體(sTfR)免疫試劑盒    Human soluble transferrin receptor,sTfR ELISA Kit
人可溶性腫瘤壞死因受體2(sTNF-R2)免疫試劑盒    Human sTNF-R2 ELISA Kit
人可溶性血小板內皮細胞粘附分1(sPECAM-1/sCD31)免疫試劑盒    Human soluble plaet endothelial cell adhesion molecule 1,sPECAM-1 ELISA Kit
人可溶性血纖蛋白單體復合物(SFMC)免疫試劑盒    Human soluble fibrin monomer complex,SFMC ELISA Kit
人可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)免疫試劑盒    Human sEPCR ELISA Kit
人可溶性胸苷激酶1(TK1)免疫試劑盒    Human Thymidine Kinase 1,Soluble(TK1)ELISA Kit
人可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(sLOX-1)免疫試劑盒    Human soluble lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1(sLOX-1)ELISA Kit
人可溶性間皮素相關肽(SMRP)免疫試劑盒    Human Soluble Mesothelin Related Peptide,SMRP ELISA Kit

 

 


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