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大鼠骨骼肌成肌細胞;L6培養

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品       牌

廠商性質代理商

所  在  地上海

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更新時間:2017-02-13 09:01:26瀏覽次數:224次

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產品簡介

大鼠骨骼肌成肌細胞;L6培養細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療

產品名稱大鼠骨骼肌成肌細胞;L6培養
貨期3-5天
發貨地上海

細胞名稱  大鼠骨骼肌成肌細胞;L6培養
形態特性   成肌細胞
生長特性  貼壁生長
特征特性   L6成肌細胞株是Yaffe從甲基膽蒽存在下大鼠大腿肌的原代培養物zui初兩代中分離得到。 L6細胞在培養基中融合形成多核的肌管和橫紋肌纖維。 細胞融合的程度隨著代數的增加而下降,因而細胞應冷凍于低代次階段并周期性地重新克隆以選擇融合能力強的細胞。 如果讓培養容器中的細胞長滿,這株細胞的成肌組分將迅速耗盡。 檢測表明肢骨發育畸形病毒(鼠痘)陰性。 
培養條件   DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優質胎牛血清,10%
傳代方法   消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。
傳代情況  PN5
凍存條件   *培養基+8%DMSO
支原體檢測  陰性
STR  
同工酶  
染色體  
使用權限  A類

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
Nα-(叔丁氧羰基)-L-*    Boc-L-Glutamic acid    2419-94-5
N-叔丁氧羰基-N-甲基-L-*    BOC-N-Methyl-L-alanine    16948-16-6
N-芴甲氧碳酰基-2.2.4.6.7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺酰-L-精胺酸    NA    
N-芴甲氧羰酰基-D-苯*    NA    
N-芴甲氧羰酰基-D-*    FMOC-D-alanine    79990-15-1
N-芴甲氧羰酰基-D-蛋氨酸(*)    NA    
N-芴甲氧羰酰基-D-*    NA    
N-芴甲氧羰酰基-D-*    NA    
N-芴甲氧羰酰基-L-苯*    NA    
N-芴甲氧羰酰基-L-蛋氨酸    NA    
N-芴甲氧羰酰基-L-*    NA    人抗神經元核抗體1型/抗Hu抗體(ANNA-1/Hu)免疫試劑盒    Human neuronal nuclear autoantibody,ANNA-1/Hu ELISA Kit
人抗神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)自身抗體免疫試劑盒    Human GFAP autoantibody ELISA Kit
人抗殺菌通透性增高蛋白抗體(BPI-Ab)免疫試劑盒    Human BPI-Ab ELISA Kit
人抗腮腺管抗體(anti-parotid duct Ab)免疫試劑盒    Human anti-parotid duct antibody ELISA Kit
人抗軟骨抗體(anti-cartilage-Ab)免疫試劑盒    Human anti-cartilage-antibody ELISA Kit
人抗狀瘤病毒17型(HPV17)抗體(IgG)免疫試劑盒    Human anti-papillomavirus type 17(HPV17)antibody(IgG)ELISA Kit
人抗人絨毛膜*抗體(AhCGAb)免疫試劑盒    Human anti-chorionic gonadotropin-antibody,AhCGAb ELISA Kit
人抗染色質解旋酶DNA結合蛋白4(CHD4)抗體免疫試劑盒    Human CHD4 antibody ELISA kit

 

 


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