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大鼠胸大動脈平滑肌細胞;A7r5培養

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品       牌

廠商性質代理商

所  在  地上海

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更新時間:2017-02-13 09:13:37瀏覽次數:120次

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產品簡介

大鼠胸大動脈平滑肌細胞;A7r5培養細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

產品名稱大鼠胸大動脈平滑肌細胞;A7r5培養
貨期3-5天
發貨地上海

細胞名稱  大鼠胸大動脈平滑肌細胞;A7r5培養
形態特性  
生長特性  貼壁生長
特征特性   大鼠胸大動脈平滑肌細胞;貼壁生長; 
培養條件    
傳代方法  
傳代情況  PN5
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  陰性
STR  
同工酶  
染色體  
使用權限  B類

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療
α-溴異丁酸    NA    
α-胰凝蛋白原A(-20℃)    CHYMOTRYPSINOGEN A    9035-75-0
β.β氧二    2-Cyanoethyl ether    1656-48-0
β-D-半乳糖五乙酸酯    beta-D-Galactose pentaacetate    4163-60-4
β-D-葡萄糖五乙酸酯    beta-D-Glucose pentaacetate    604-69-3
β-雌二醇;雌甾二醇;17β-雌二醇;3,17β-二羥基-1,3,5(10)雌甾三烯;1,3,5(10)-雌甾三烯-3,17β-二醇;雌甾-1,3,5(10)-三烯-3,17β-二醇    β-Estradiol;17β-Estradiol;3, 17β-Dihydroxy-1, 3, 5(10)-estratriene;1, 3, 5(10)-Estratriene-3, 17β-diol;cis-Estradiol;3, 17-Epidihydroxyestratriene;17β-Estra-1, 3, 5(10)-triene-3, 17β-diol;    50-28-2
β-甘油磷酸二鈉鹽,五水    Disodium beta-glycerophosphate pentahydrate    819-83-0
β-谷甾醇(含菜油甾醇)    beta-Sitosterol    83-46-5
β-胡蘿卜素~1600U/MG(-20℃)    beta-Carotene    7235-40-7人抗抗體(AsAb)免疫試劑盒    Human anti-sperm antibody,AsAb ELISA Kit
人抗角蛋白絲聚集素/絲集蛋白抗體(AFA)免疫試劑盒    Human anti-filaggrin antibody,AFA ELISA Kit
人抗角蛋白抗體免疫試劑盒    Human Anti-keratin antibody ELISA Kit
人抗膠原蛋白抗體(CLA)免疫試劑盒    Human Collagen autoantibody,CLA ELISA Kit
人抗甲狀腺微粒體抗體(ATMA/TMAB)免疫試劑盒    human Anti-Thyroid Microsome Antibody,ATMA/TMAB ELISA KIT
人抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)免疫試劑盒    human Anti-thyroid-globulin antibody,ATGA ELISA KIT
人抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)免疫試劑盒    Human anti-Thyroid-Peroxidase antibody,TPO-Ab ELISA Kit

 

 


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