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大鼠雪旺細胞;RSC96使用說明書

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所  在  地上海市

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更新時間:2017-02-13 09:15:08瀏覽次數:179次

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產品簡介

大鼠雪旺細胞;RSC96使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療

細胞名稱  大鼠雪旺細胞;RSC96使用說明書
形態特性   神經元
生長特性  貼壁生長
特征特性   RSC96細胞株是原代培養的大鼠雪旺細胞經長時間培養后自發轉化而成的[PubMed: 9766530]。 2002年十二月提交到ATCC的培養物污染了支原體。 其后代通過BM 細胞周期蛋白處理21天消除支原體。 處理后六周,用Hoechst染色、PCR和標準培養測試進行支原體檢測。 結果都呈陰性。 
培養條件   DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優質胎牛血清,10%
傳代方法   消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。
傳代情況  PN5
凍存條件   *培養基+8%DMSO
支原體檢測  陰性
STR  
同工酶  
染色體  
使用權限  A類

產品名稱大鼠雪旺細胞;RSC96使用說明書
貨期3-5天
發貨地上海

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
α-溴丁酸乙酯    DL-Ethyl 2-bromobutyrate    533-68-6
β-葡萄糖苷酶 杏仁 (+4℃)    BETA-GLUCOSIDASE    9001-22-3
β-乳球蛋白 (+4℃)    BETA-LACTOGLOBULIN    9045-23-2
β-*腺嘌呤二核苷酸還原型輔酶二鈉鹽(+4℃)    NA    
吖啶紅 3B    NA    
阿拉伯樹膠    Arabic gum    9000/1/5
阿拉西A    MANNIDE MONOOLEATE    9049-98-3
阿利新黃 GXS    Alcian Yellow    61968-76-1人抗甲型肝炎病毒抗體IgG(anti-HAV IgG)免疫試劑盒    Human anti-hepatitis A virus antibody IgG,anti-HAV-IgG ELISA Kit
人抗甲型肝炎病毒(HAV)抗體免疫試劑盒    Human anti-hepatitis A virus(HAV)antibody ELISA kit
人抗基底節(BG)自身抗體免疫試劑盒    Human anti basal ganglia(BG)autoantibody ELISA kit
人抗肌內膜抗體(EMA)(IgA)免疫試劑盒    Human anti-Endomysial antibody (EMA)(IgA) ELISA kit
人抗肌內膜(EMA)抗體(IgG)免疫試劑盒    Human anti-Endomysial (EMA) antibody (IgG) ELISA kit
人抗肌集鈣蛋白抗體(IgG)免疫試劑盒    Human anti-calsequestrin antibody IgG ELISA Kit
人抗肌動蛋白抗體(AAA)免疫試劑盒    Human anti-Actin antibody,AAA ELISA Kit
人抗黃體生成素抗體(Anti LH Ab)免疫試劑盒    Human Anti LH Ab ELISA Kit
人抗環胍氨酸肽(CCP)抗體免疫試劑盒    Human anti-CCP antibody ELISA Kit
人抗琥珀酸脫氫酶黃素亞單位抗體(IgG)免疫試劑盒    Human anti-succinate dehydrogenase complex subunit A flavoprotein antibody(IgG)ELISA Kit

 

 


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