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家貓腎細胞;CATK1培養

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產品型號

品       牌

廠商性質代理商

所  在  地上海

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更新時間:2017-02-13 11:20:45瀏覽次數:379次

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產品簡介

家貓腎細胞;CATK1培養細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療

產品名稱家貓腎細胞;CATK1培養
貨期3-5天
發貨地上海

細胞名稱  家貓腎細胞;CATK1培養
形態特性   上皮樣,多角形
生長特性  貼壁生長
特征特性   該細胞來源于一雄性家貓的腎組織。2000年由*昆明細胞庫建立。 
培養條件   M-199: with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS)  15%NBS
傳代方法   1:2傳代;3-4天一次
傳代情況  P4
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  熒光法(-)
STR   -
同工酶  
染色體  
使用權限  A類

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
牛肉膏    BOTTLE BEEF EXTRAC    68990-09-0
牛血紅蛋白(+4℃)    HEMOGLOBIN    9008-02-0
壬基酚聚氧乙烯醚    Arkopal N 100    9016-45-9
偶氮二羧酸二乙酯97%    Diethyl azodicarboxylate    1972-28-7
偶氮二(陰涼)(*)    2,2'-Azobis(2-methylpropionitrile)    78-67-1
偶氮磺III鈉鹽    SULFONAZO III    68504-35-8
偶氮氯磷I    ;    85561-96-2
偶氮氯磷III    CHLOROPHOSPHONAZO III    1914-99-4
偶氮胭脂紅B(老批號)    AZOCARMINE B    25360-72-9
帕拉派克 PS    PORAPAK P-S (100-120 MESH ASTM) FOR GC    63993-71-5
帕拉派克 R    PORAPAK R (100-120 MESH ASTM) FOR GC    12673-67-5人α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)免疫試劑盒    Human α-glucosidase ELISA Kit
人α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)免疫試劑盒    Human α-SMA ELISA Kit
人α-內*肽(α-EP)免疫試劑盒    Human α-Endomorphin,α-EP ELISA Kit
人α肌動蛋白(α Actin)免疫試劑盒    Human Alpha-Actin,α Actin ELISA Kit
人α-黑色素細胞刺激素(α-MSH)免疫試劑盒    Human α-melanocyte stimulating hormone,α-MSH ELISA Kit
人α*S轉移酶(α-GST)免疫試劑盒    Human α-GST ELISA Kit
人α干擾素(IFN-α)免疫試劑盒    Human Interferon α,IFN-α ELISA Kit
人α-輔肌動蛋白4(ACTN-4)免疫試劑盒    Human ACTN-4 ELISA Kit
人α-輔肌動蛋白3(ACTN-3)免疫試劑盒    Human ACTN-3 ELISA Kit

 

 

 


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