犬腎細(xì)胞；MDCK（NBL-2）使用說明書

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產(chǎn)品簡介

犬腎細(xì)胞；MDCK（NBL-2）使用說明書細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 犬腎細(xì)胞；MDCK(NBL-2)使用說明書
形態(tài)特性   上皮細(xì)胞
生長特性貼壁生長
特征特性   1958年九月 S.H. Madin and N.B. Darby從一只外觀正常的成年雌性英國小獵犬的腎分離等到MDCK細(xì)胞株。角蛋白免疫過氧化物酶染色呈陽性。MDCK被用于研究β-粥樣蛋白前體的處理及其蛋白水解產(chǎn)物。
培養(yǎng)條件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
傳代方法   消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 P(55+5)
凍存條件   *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類

產(chǎn)品名稱	犬腎細(xì)胞；MDCK(NBL-2)使用說明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

犬腎細(xì)胞；MDCK(NBL-2)使用說明書復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合
犬腎細(xì)胞；MDCK(NBL-2)使用說明書操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
5,5-二甲基-1,3-環(huán)己二酮;醛試劑;1,1-二甲基環(huán)己烷-3,5-二酮;達(dá)米東;5,5-二甲基二氫*;1,1-二甲基-3,5-環(huán)己二酮   5,5-DiMethyl-1,3-cyclohexanedione;1,1-DiMethyl-3,5-cyclohexanedione;1,1-DiMethyl-3,5-diketocyclohexane;DiMethyldihydroresorcinol;Methone   126-81-8
壬烯基丁二酸酐   NONENYLSUCCINIC ANHYDRIDE   28928-97-4
刃天青鈉   Resazurin sodium salt   62758-13-8
日落黃   Food Yellow 3   2783-94-0
*   LysozyMe froM chicken egg white BioCheMika   12650-88-3
肉豆蔻酸異丙酯（+4℃）   NA
肉湯瓊脂培養(yǎng)基   Broth Agar Medium
乳化劑   EMULSIFIER
乳酸菌MRS瓊脂（+4℃）   NA
乳酸菌MRS肉湯   NA
乳酸鋰   LITHIUM LACTATE   867-55-0人ras同源物基因家族成員b(RHOB)免疫試劑盒   human RHOB ELISA Kit
人Prominin 2(PROM2)免疫試劑盒   Human PROM2 ELISA Kit
人Podocin 免疫試劑盒   Human podocin ELISA Kit
人PL7抗體/抗蘇氨酰tRNA合成酶(PL7)免疫試劑盒   Human anti-PL7-antibody ELISA Kit
人PL12抗體/抗丙氨酰tRNA合成酶(PL12/AlaRS)免疫試劑盒   Human anti-PL12-antibody,PL12/AlaRS ELISA Kit
人PC4,SFRS1互動(dòng)蛋白1(PSIP1)免疫試劑盒   Human PSIP1 ELISA kit
犬腎細(xì)胞；MDCK(NBL-2)使用說明書人P53抗體免疫試劑盒   Human P53 antibody ELISA Kit
人P2蛋白抗體(IgM)免疫試劑盒   Human myelin protein two antibody IgM ELISA Kit
人P2蛋白抗體(IgG)免疫試劑盒   Human myelin protein two antibody IgG ELISA Kit
人P27蛋白(P27)免疫試劑盒   Human P27 protein ELISA Kit

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