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上海撫生實業有限公司
兔主動脈平滑肌細胞;CCC-SMC-2使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。
產品名稱 | 兔主動脈平滑肌細胞;CCC-SMC-2使用說明書 |
貨期 | 3-5天 |
發貨地 | 上海 |
細胞名稱 兔主動脈平滑肌細胞;CCC-SMC-2使用說明書
形態特性 多角
生長特性 貼壁生長
特征特性 利用2月齡大耳白兔胸腹主動脈,去除內皮,剝離外膜,進行原代培養,經aSMA鑒定純度,連續培養可傳代16次以上。
培養條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 20%FBS
傳代方法 1:3傳代;3~4天1次。
傳代情況 P5
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權限 A類
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
三氧化鉬 Molybdenum trioxide 1313-27-5
三氧化鎢 Tungsten trioxide 1314-35-8
三乙醇胺 Triethanolamine 102-71-6
三乙二醇二甲基丙烯酸酯 Triethylene glycol dimethacrylate 109-16-0
三乙二醇二甲醚 99.9% NA
三乙二醇 Triethylene glycol monoethyl ether 112-50-5
三乙基硅烷三氟磺酸酯 Triethylsilyl trifluoromethanesulfonate 79271-56-0
三乙基鋁(*) Triethylaluminum 97-93-8
三乙基氯硅烷 Chlorotriethylsilane 994-30-9
三乙基 Triethylborane 97-94-9
三醋精;三乙酸甘油酯;甘油三乙酸酯 Triacetin; 102-76-1
三乙烯二胺 Triethylenediamine 280-57-9人B淋巴細胞抗原(CD20)免疫試劑盒 Human CD20 ELISA Kit
人blca-4 免疫試劑盒 Human blca-4 ELISA Kit
人blca-1 免疫試劑盒 Human blca-1 ELISA Kit
人Bcl-2樣蛋白1(BCL2L1)免疫試劑盒 Human BCL2L1 ELISA Kit
人B7-H4 免疫試劑盒 Human B7-H4 ELISA Kit
人A組鏈球菌菌壁多糖抗體(ASP)免疫試劑盒 Human antibody to group A streptococcal polysaccharide,ASP ELISA Kit
人A組鏈球菌多糖抗原(ASP Ag)免疫試劑盒 Human group A streptococcal polysaccharide antigen,ASP Ag ELISA kit
人A激酶PRKA錨定蛋白12(Akap12)免疫試劑盒 human Akap12 ELISA Kit
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