細胞名稱 兔角膜前基質層成纖維細胞；RCFBF培養
形態特性 成纖維樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 北京眼科研究所建系細胞。
培養條件 F12: Ham's F12 Nutrient Mixture 5%FBS
傳代方法 1:3傳代；2~3天1次。
傳代情況 P8
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法（-）
STR -
同工酶
染色體
使用權限 A類
復蘇操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
示蛋白胨 NA
蛋白胨 Proteose peptone 91079-38-8
眎胨3號 NA
叔丁胺¤ tert-Butylamine 75-64-9
叔丁醇鉀 PotassiuM tert-butoxide 865-47-4
叔丁基二苯基氯硅烷 tert-Butylchlorodiphenylsilane 58479-61-1
叔丁基二甲基氯硅烷（2-8℃） tert-Butyldimethylsilyl chloride 18162-48-6
叔丁基異氰酸酯 tert-Butylisocyanate 1609-86-5
叔十二硫醇 tert-dodecylthiol 25103-58-6
曙紅 Y 醇溶 Solvent Red 43 15086-94-9人3-葡萄糖苷酸孕二醇(PdG)免疫試劑盒 Human Pregnanediol-3-glucuronide,PdG ELISA kit
人Ⅱ型前膠原羧基端肽(PⅡCP)免疫試劑盒 Human Carboxyterminal propeptide of type Ⅱ procollagen,PⅡCP ELISA Kit
人Ⅱ型前膠原N端前肽(PⅡNP)免疫試劑盒 Human procollagen Ⅱ N-terminal peptide,PⅡNP ELISA Kit
人Ⅱ型膠原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)免疫試劑盒 Human type Ⅱ collagen helical peptide,HELIX-ⅡELISA Kit
人Ⅱ型膠原交聯C端肽(CTX-Ⅱ)免疫試劑盒 Human Cross Linked C-opeptide Of Type II Collagen,CTX-Ⅱ ELISA Kit
人Ⅱ型膠原代謝產物C2C(C2C)免疫試劑盒 Human Collagen Type II Cleavage,C2C ELISA Kit
人Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)免疫試劑盒 Human C-opeptide of type Ⅱ collagen,CTX-Ⅱ ELISA Kit
人Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)免疫試劑盒 Human Collagen Type Ⅱ,Col Ⅱ ELISA Kit
人Ⅱ型肺泡細胞表面抗原(KL-6/MUC1)免疫試劑盒 Human KL-6/MUC1 ELISA kit
人28S抗核糖體抗體(28S rRNP)免疫試劑盒 Human 28S ribosome RNP antibody,28S rRNP ELISA Kit
人26S蛋白酶體非ATP酶調節亞基11(PSMD11)免疫試劑盒 Human PSMD11 ELISA Kit
人25羥基*3(25 HVD3)免疫試劑盒 Human 25-hydroxy vitamin D3,25 HVD3 ELISA Kit
