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您一定知道的貼壁細胞的傳代培養方法

閱讀:541發布時間:2016-12-14

細胞系的維持通過換液傳代再換液、再傳代和細胞種子凍存來實現。
對每一個細胞系來說都有其自身的特點,要做好建系的維持必須記錄好細胞檔案,換液傳代和做好細胞系(或株)的鑒定和管理工作。
貼壁細胞的傳代培養方法注意事項
1.傳代培養時注意無菌操作并防止細胞間的交叉污染。所有操作盡量靠近酒精燈火焰。每次只進行一種細胞的操作。每種細胞使用一套器材。
2. 每天觀察細胞形態,掌握好細胞是否健康的標準:健康細胞的形態飽滿,折光性好,生長致密時即可傳代。
3.如發現細胞有污染跡象,應立即采取措施,一般應棄置污染的細胞,如果必須挽救,可加含有抗生素的BBS或培養基反復清洗,隨后培養基中加入較大量的抗生素,并經常更換培養基。
實驗步驟:
1.入無菌室之前用肥皂洗手,再用75% 的酒精擦拭消毒雙手;
2.倒置顯微鏡下觀察細胞形態,確定細胞是否傳代及細胞需要稀釋的倍數。將培養用液37℃下預熱。
3. 超凈臺臺面應整潔,用75%酒精棉球擦拭清潔;
4.打開超凈工作臺的紫外燈照射臺面20min左右,關閉紫外燈,打開風機清潔空氣除去臭氧;
5.點燃酒精燈;取出無菌試管,巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內。
6.將培養用液瓶口用75%酒精消毒,過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上。
7. 倒掉培養細胞的舊培養基。酌情可用2-3ml Hanks液洗去殘留的就培養基,或用少量*涮洗一下。
8.每個大培養瓶加入1ml*,小培養瓶用量酌減,蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察。當細胞收回突起變圓時立即翻轉培養瓶,使細胞脫離*,然后將*倒掉。注意勿使細胞提早脫落入消化液中。
9.加入少量的含血清的新鮮培養基,反復吹打消化好的細胞使其脫壁并分散,再根據分傳瓶數補加一定量的含血清的新鮮培養基(7-10ml/大瓶;3-5ml/小瓶)制成細胞懸液,然后分裝到新培養瓶中。蓋好瓶蓋,適度擰緊后稍回轉,以利于CO2的進入,將培養瓶放回CO2培養箱。
10.對懸浮培養細胞,步驟7-9不做。直接將細胞懸液進行離心去除舊培養基上清,加入新鮮培養基,然后分裝到各瓶中。
?細胞系
4-吡啶硫醇    CAS號:    4556-23-4    進口、組裝
3-氟苯甲酸甲酯    CAS號:    455-68-5    *
2-氟-4-硝基苯甲醚    CAS號:    455-93-6    現貨直銷
4,4,5,5,6,6-七氟-1-(2-噻吩基)-1,3-己二酮    CAS號:    4559-70-0  進口、分裝
對氟苯甲酸    CAS號:    456-22-4    進口、組裝
4-嘧啶酮    CAS號:    4562-27-0    *
2-氨基惡唑    CAS號:    4570-45-0    現貨直銷
對甲氧基苯硼酸    CAS號:    45713-46-0    進口、分裝
姜黃素    CAS號:    458-37-7    進口、組裝
4-溴-3-氟苯甲醚    CAS號:    458-50-4    *
對氟苯乙酰氯    CAS號:    459-04-1    現貨直銷
對氟苯乙腈    CAS號:    459-22-3    進口、分裝
5-甲基-1-茚酮    CAS號:    4593-38-8    進口、組裝
2-溴嘧啶    CAS號:    4595-60-2    *
嘧啶-5-羧酸    CAS號:    4595-61-3    現貨直銷
細胞系


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