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技術文章

貼壁細胞傳代培養實驗步驟

閱讀:6555發布時間:2017-3-6

傳代培養時注意無菌操作并防止細胞間的交叉污染。細胞系所有操作盡量靠近酒精燈火焰。每次只進行一種細胞的操作。每種細胞使用一套器材。
每天觀察細胞形態,掌握好細胞是否健康的標準:健康細胞的形態飽滿,折光性好,生長致密時即可傳代。
如發現細胞有污染跡象,應立即采取措施,一般應棄置污染的細胞,如果必須挽救,可加含有抗生素的BBS或培養基反復清洗,隨后培養基中加入較大量的抗生素,并經常更換培養基。
實驗步驟:
1.入無菌室之前用肥皂洗手,再用75% 的酒精擦拭消毒雙手;
2. 倒置顯微鏡下觀察細胞形態,確定細胞是否傳代及細胞需要稀釋的倍數。 將培養用液37℃下預熱。
3.超凈臺臺面應整潔,用75%酒精棉球擦拭清潔;
4.打開超凈工作臺的紫外燈照射臺面20min左右,關閉紫外燈,打開風機清潔空氣除去臭氧;
5.點燃酒精燈;取出無菌試管,巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內。
6.將培養用液瓶口用75%酒精消毒,過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上。
7.倒掉培養細胞的舊培養基。酌情可用2-3ml Hanks液洗去殘留的就培養基,或用少量*涮洗一下。
8.每個大培養瓶加入1ml*,小培養瓶用量酌減,蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察。當細胞收回突起變圓時立即翻轉培養瓶,使細胞脫離*,然后將*倒掉。注意勿使細胞提早脫落入消化液中。
9.加入少量的含血清的新鮮培養基,反復吹打消化好的細胞使其脫壁并分散,細胞系再根據分傳瓶數補加一定量的含血清的新鮮培養基(7-10ml/大瓶;3-5ml/小瓶)制成細胞懸液,然后分裝到新培養瓶中。蓋好瓶蓋,適度擰緊后稍回轉,以利于CO2的進入,將培養瓶放回CO2培養箱。
286-20-4    氧化環己烯    
286961-14-6    N-Boc-1,2,5,6-四氫吡啶-4-硼酸頻哪醇酯    
28697-53-2    D-阿拉伯糖    
2877-26-1    十八烷基異氰酸酯    
2878-14-0    2-甲基烯丙基胺    
28783-41-7    4,5,6,7-四氫噻吩[3,2-c]吡啶鹽酸鹽    
28804-47-9    鄰/對甲苯磺酸甲酯    
2881-99-4    3-氰基苯肼鹽酸鹽    
288-36-8    三氮唑    
28888-44-0    6,7-二甲氧基-2,4-喹唑啉二酮    
2892-51-5    方酸    
2893-78-9    二氯異氰尿酸鈉    
29022-11-5    Fmoc-*    
290-37-9    吡嗪    
2905-21-7    2-氟苯磺酰氯    
2905-23-9    2-氯苯磺酰氯    
29079-00-3    4-乙炔聯苯    
2909-38-8    間氯苯異氰酸酯    
2916-68-9    2-(*硅基)乙醇    
29232-39-1    2 , 3-二溴-5-甲基吡 
細胞系   

 


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