4× 核酸液相雜交液10mL圖片

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更新時間：2017-01-18 14:56:52瀏覽次數(shù)：343次

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  探針標(biāo)記及檢測產(chǎn)品

顯色

核酸雜交

轉(zhuǎn)膜

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上海邦景實業(yè)有限公司

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產(chǎn)品簡介

4× 核酸液相雜交液10mL圖片運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

4× 核酸液相雜交液10mL圖片產(chǎn)品介紹：

4× 核酸液相雜交液10mL圖片使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實驗前需自備的試劑：7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：成分加入的體積自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應(yīng)緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 滅菌的超純水補足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5～10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做乙醇沉淀時使其終濃度達(dá) 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
7. 離心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用適當(dāng) Buffer 溶解沉淀。注：通過第 5～8 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP，如要 *將其除去時，乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽提除去蛋白質(zhì)時，請在第
8 步之后進行。
4× 核酸液相雜交液10mL圖片磷酸化反應(yīng)標(biāo)記：
A. 去磷酸化反應(yīng)
1. 實驗前需自備的試劑：TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：成分加入的體積自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶（CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 滅菌的超純水補足到 150 μL
3. 50℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//（25：24：1），充分混勻。
5. 離心，取上層（水層）移到另一個微量離心管中。
6. 重復(fù)操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui終濃度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
9. 離心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。

10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
4× 核酸液相雜交液10mL圖片磷酸化反應(yīng)（前反應(yīng)）：
1. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：

2. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應(yīng)的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標(biāo)記：
當(dāng)摻入水平很低的時候，需要使用本步驟，即通過體積排阻色譜或過濾試劑盒除去未反應(yīng)的標(biāo)記。Sephadex G-50 層析柱（需另購）對于去除未摻入的 dNTPs 效果很好，它還能大幅減少小于 20 個堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5～10 分鐘以使 T4 多聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長度不小于 10 個堿基的寡核苷酸。

明膠溶液，2%，PCR    1.5mL   硫酸*
高 GC DNA 清除劑，PCR    1.5mL   碘化丙啶苯
MnCl2溶液，25mM，PCR    5mL   活性藍(lán) 19
甲酰胺，PCR    5mL   馬來酸鈉
MgSO4溶液，10mM，PCR    5mL   硼氫化氰鈉
石蠟油，PCR    10mL   乙基二甲基胺丙基碳化二亞胺
DMSO，PCR    1.5mL   多聚 -L- 賴氨酸 (15-30 萬 )
海藻糖溶液，1.5M，PCR    1.5mL   多聚 -L- 賴氨酸 (3-7 萬 )
甜菜堿溶液，5M，PCR    1.5mL   多聚 -L- 賴氨酸 (7-15 萬 )
綠如藍(lán)染料，PCR    0.1mL   D- 果糖 -6- 磷酸二鈉
綠如藍(lán)染料，PCR    1mL   *抑制劑
dNTP 溶液 ,10mM   0.5mL   Nα- 苯甲酰*乙酯
dNTP 溶液 ,10mM   5mL   二甲苯青
dNTP 溶液，2.5mM   0.5mL   疊氮鈉
dNTP 溶液，2.5mM   5mL   聚蔗糖 400
dNTP 溶液，100mM    0.5mL   L- * ( 氧化型 )
dNTP 溶液，100mM    5mL   L-(+) 乳酸鋰鹽
dUTP 溶液，100mM    0.4mL   α- 氰基 -4- 羥基肉桂酸
dITP 溶液，2.5mM   2mL   天狼猩紅

4× 核酸液相雜交液10mL圖片L-PROLINEL-*美國藥典級白色至米白色粉末RTsigma
Hypoxanthine6-羥基嘌呤100毫克USP級，900mcg/mg
NUCLEASELIMINATOR™去除核酸酶紙巾生物技術(shù)級RTsigma
H-Pro-OBzl•HClL-*芐酯鹽酸鹽5克特純，98.0%
HISTOCHOICE®MB(MOLECULARBIOLOGY)TISSUEFIXATIVE,1X分子生物學(xué)組織固定劑組織學(xué)級無色至微黃無混濁液體RTsigma
Histaminedihydrochloride組胺雙鹽酸鹽1克BR，99%
AGAROSESFR™超高分辨率瓊脂糖生物技術(shù)級白色精細(xì)粉末RTsigma
Heptanoicacid葡萄花酸1克BR，97%
IPTGULTRAPUREIPTG超純級白色結(jié)晶粉末FROZENsigma
Gumtragacanthpowder西黃蓍膠粉5克GR，99.5%
inol，

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