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甜菜堿溶液，5M，PCR 級1.5mL實驗步驟

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更新時間：2017-01-19 13:53:05瀏覽次數(shù)：813次

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產(chǎn)品簡介

甜菜堿溶液，5M，PCR 級1.5mL實驗步驟運輸及保存低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

甜菜堿溶液，5M，PCR 級1.5mL實驗步驟合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
甜菜堿溶液，5M，PCR 級1.5mL實驗步驟按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機引物，將出現(xiàn)多個小片段）。

產(chǎn)品介紹：
產(chǎn)品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

還原糖：≤0.10%
〖熔點〗：148～152℃
〖灼燒殘渣〗：≤0.1%
〖重金屬〗：≤10ppm
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：白色結(jié)晶或結(jié)晶粉未，清涼味甜，無異味
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗
〖保存〗：RT
低聚果糖
〖英文名稱〗：FOS；Fructo-oligosaccharide
〖其他名稱〗：寡果糖；蔗果低聚糖；果寡糖；蔗果三糖族低聚糖
〖CAS號〗：308066-66-2
〖級別〗：BR
低聚果糖〖含量〗：≥90.0%
葡萄糖+蔗糖+果糖：≤10%
水分：≤5.0%

藍(lán)色葡聚糖 2000   平滑肌細(xì)胞生長因子 ( 不含血清 )
阿拉伯樹膠粉   前列腺上皮細(xì)胞生長因子
果膠   前脂肪細(xì)胞生長因子
明膠   上皮細(xì)胞生長因子
酪蛋白   上皮細(xì)胞生長因子
α- *   上皮細(xì)胞生長因子 -2
D- 氨基酸氧化酶   少突膠質(zhì)前體細(xì)胞生長因子
L- 氨基酸氧化酶   少突膠質(zhì)前體細(xì)胞生長因子
β- *   少突膠質(zhì)細(xì)胞生長因子
*酶   神經(jīng)元生長因子
卵白蛋白   腎系膜細(xì)胞生長因子
天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶   髓核細(xì)胞生長因子
碳酸酐酶 ( 牛紅血球 )   小膠質(zhì)細(xì)胞生長因子
過氧化氫酶 ( 牛肝 )   心肌細(xì)胞生長因子
過氧化氫酶