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通用型 RT-LAMP 試劑盒50 次實驗方法

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更新時間:2017-01-19 15:24:30瀏覽次數:563次

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產品簡介

通用型 RT-LAMP 試劑盒50 次實驗方法運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

通用型 RT-LAMP 試劑盒50 次實驗方法產品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。

通用型 RT-LAMP 試劑盒50 次實驗方法合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

甲萘酚:合格
萘:合格
乙醇溶解試驗:合格
水溶液反應:合格
〖灼燒殘渣〗:≤0.05%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:白色或極淺黃色結晶性粉末或薄碎片。微有*氣味。久貯或遇光色漸變深。加熱升華。能隨乙醇或水蒸氣揮發。能還原氨性*。1g溶于1000ml水、80ml沸水、0.8ml乙醇、17ml氯方、1.3ml乙迷。溶于甘油、橄欖油和氫氧溶液。〖相對密度〗1.22。〖熔點〗121~123℃。沸點285~286℃。閃點161℃。zui大吸收波長(95%乙醇)226、265、275、286、320、331nm(ε91194、3911、4559、3301、1861、2163)。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)溴、氯、氯酸鹽、鈮、銅、亞硝酸鹽和鉀的檢定。一氧化碳、銅、亞硝酸鹽和鉀的測定。烯丙醇、甲醇、氯方等的定性測定。酚磺轉移酶的熒光測定底物。乙烯吸收劑。熒光指示劑。酸堿指示劑。
〖保存〗:RT,避光
乙二縮雙(鄰氨基酚)
〖英文名稱〗:GBHA;Glyoxal-bis-(2-hydroxyanil);Di-(o-hydroxyphenylimino)ethane;2,2′-(Ethanediylidenedinitrilo)diphenol
〖其他名稱〗:乙二縮雙鄰羥苯胺;乙二雙(2-羥基苯胺);鈣紅;乙二縮雙(鄰氨基*);乙二-雙(2-羥基縮苯胺);新鈣試劑
〖CAS號〗:1149-16-2
C14H12N2O2=240.26
〖級別〗:CP
〖熔點〗:194~198℃
乙醇溶解試驗:合格

BAY11-7082(NF-κB 抑制劑 )    Rosetta-gami(DE3) 菌種
Brefeldin A( 蛋白轉運抑制劑 )    DH5α 菌種
Camptothecin( * )    柱式鼠尾 DNAout
Canavanine,sulfate(iNOS 抑制劑 )    熱啟動 Tth DNA 聚合酶
Carboxy-PTIO( 一氧化氮清除劑 )    增強型天狼猩紅染色試劑盒
Carboxy-PTIO( 一氧化氮清除劑 )    茜素紅 S 染色試劑盒
Ac-DEVD-CHO(Caspase3 抑制劑 )    超快核酸轉膜試劑盒
Catalase( 抗氧化酶 )    Stbl3 感受態細胞
Catechin hydrate( 抗氧化劑 )    天凈沙非同位素探針雜交試劑盒
Cisplatin(DNA 交聯劑 / 細胞凋亡誘導劑 )    天凈沙非同位素探針雜交試劑盒
Cycloheximide    HMS174(DE3)菌種
Cyclosporin A( 免疫抑制劑 /PP2B 抑制劑 )    柱式探針純化試劑盒
Decitabine *


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