無脊椎動物種屬鑒定 PCR Mix100 次實驗方法

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更新時間：2017-01-19 16:17:18瀏覽次數(shù)：312次

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  核酸擴增產(chǎn)品

常用PCR引物

種屬鑒定PCR Mix

單細胞擴增

其他擴增試劑盒

LAMP擴增

全基因組擴增（WGA）

即用型RT-PCR

RT

即用型PCR

PCR成分及添加劑

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上海邦景實業(yè)有限公司

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產(chǎn)品簡介

無脊椎動物種屬鑒定 PCR Mix100 次實驗方法運輸及保存低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細介紹

無脊椎動物種屬鑒定 PCR Mix100 次實驗方法合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
無脊椎動物種屬鑒定 PCR Mix100 次實驗方法按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機引物，將出現(xiàn)多個小片段）。

產(chǎn)品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標記等。

對稀土金屬靈敏度試驗：合格
吸光度試驗：合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：深紫紅色粉末。溶于水
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)與稀土元素在酸性溶液中形成藍紫色絡(luò)合物。用于球墨鑄〖鐵〗中稀土的測定
〖保存〗：RT
固藍B鹽
〖英文名稱〗：Fast blue B salt；Fast blue salt BN；o-Dianisidine tetrazotized；Dianisidine blue；Azoic diazo component 48；Di-o-anisidine diazotatezinc double salt；Tetrazotized di-2-anisidine；ZnCl2；Echtblausalz B；Naphthanil diazo blue B salt
〖其他名稱〗：堅牢藍B鹽；重氮藍B鹽；藍光重氮色鹽藍；氯化四氮鄰二甲氧基苯胺；牢固蘭B鹽；耐曬蘭B〖鋅〗鹽；堅固蘭B鹽；堅藍B〖鋅〗鹽
〖CAS號〗：14263-94-6
C14H12N4O2Cl2?ZnCl2=475.47
〖級別〗：試劑級
〖含量〗：≥80.0%
〖重金屬〗：≤10ppm
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：深綠色或深褐色粉末。對光敏感，溶于水，zui大吸收波長371nm
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)組織化學(xué)中用于重氮化偶合反應(yīng)。檢定磷酸酯酶。紙色譜測定黃酮、胺和酚。0.5%水溶液可作顯色劑。薄層色譜分析測定黃曲每素。蛋白質(zhì)染色劑
〖保存〗：RT，避光
鄰聯(lián)茴香胺

Ficoll-Paque 介質(zhì)   柱式植物葉綠體 DNAout
Deaza dGTP   柱式植物油 DNAout
雙脫氧 dNTP 套裝   柱式質(zhì)粒 DNAout
dNTP 和引物清除劑   柱式質(zhì)粒 DNAout
魯米諾   離心管 ( 配研磨杵用 )
AMPPD   離心管 ( 配研磨杵用 )
山羊抗小鼠 IgG(H+L), 堿性磷酸酶標記   轉(zhuǎn) ESPES 基因植物 PCR Mix
山羊抗兔 IgG(Fc)，堿性磷酸酶標記   轉(zhuǎn) ESPES-NOs 基因植物 PCR Mix
山羊抗人 IgG(H+L)，堿性磷酸酶標記   轉(zhuǎn) Lectin 基因植物 PCR Mix
山羊抗大鼠 IgG(H+L)，堿性磷酸酶標記   *溶液 ,50mg/mL
驢抗山羊 IgG，堿性磷酸酶標記   滋養(yǎng)層細胞生長因子
山羊抗兔 IgG(H+L)，辣根過氧化物酶標記   紫外交聯(lián)儀
山羊抗兔 IgG(H+L)，辣根過氧化物酶標記   自誘導(dǎo)培養(yǎng)基 (lac 啟動子 )
山羊抗小鼠 I

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