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植物種屬鑒定 PCR Mix 9100 次實驗方法

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產(chǎn)品型號

品       牌

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更新時間:2017-01-19 16:26:31瀏覽次數(shù):328次

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產(chǎn)品簡介

植物種屬鑒定 PCR Mix 9100 次實驗方法運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

植物種屬鑒定 PCR Mix 9100 次實驗方法產(chǎn)品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶,內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。

植物種屬鑒定 PCR Mix 9100 次實驗方法合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)R坏?RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現(xiàn)多個小片段)。

〖其他名稱〗:碘化丙錠
〖CAS號〗:25535-16-4
C27H34I2N4=668.39
〖級別〗:BR
〖含量〗:≥94.0%(HPLC)
溶解性:Red solution at 1mg/ml in water
Water by karl fischer:≤5.0%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:紅色粉末,對濕、光、空氣敏感。〖熔點〗220~225℃(分解)。有導致遺傳損害可能性。有刺激性
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)核酸熒光染色劑
〖保存〗:2~8℃,保質(zhì)期4年
N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺鈉鹽
〖英文名稱〗:DAOS;N-Ethyl-N-(2-hydrroxt-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline sodium salt 

柱式醬油 DNAout    印跡膜抗體稀釋液
免 RNA 提取 RT-PCR 試劑盒     茚三酮
DNA 上樣液 ( 紅 ),6×( 非甘油 )    熒光胺
DNA 上樣液 ( 藍 ),6×( 非甘油 )    熒光尺
超螺旋 DNA 分子量標準    熒光法死細胞檢測試劑盒
PAGE 膠長加樣槍頭    熒光染色細胞凋亡檢測試劑盒
水飽和正丁醇    熒光素 (FITC) 標記親和素
預混型丙烯酰胺 - 甲叉雙丙烯干粉 (19:1)    熒光素標記的*
預混型丙烯酰胺 - 甲叉雙丙烯干粉 (29:1)    *
冷凍型血液 RNA 保存液    熒光增白劑 28
柱式 G+細菌 RNAout    螢火蟲熒光素
柱式病毒 RNA-DNA 雙提試劑盒    螢火蟲熒光素酶報告基因檢測試劑盒
凝膠法 miRNA 分離試劑盒     油紅 O
    雜交管 (


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