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轉(zhuǎn) Lectin 基因植物 PCR Mix100 次原理

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

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更新時(shí)間:2017-01-19 16:30:30瀏覽次數(shù):217次

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產(chǎn)品簡介

轉(zhuǎn) Lectin 基因植物 PCR Mix100 次原理運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細(xì)介紹

轉(zhuǎn) Lectin 基因植物 PCR Mix100 次原理合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)R坏?RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
轉(zhuǎn) Lectin 基因植物 PCR Mix100 次原理按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標(biāo)記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段(如果使用隨機(jī)引物,將出現(xiàn)多個(gè)小片段)。

產(chǎn)品及特點(diǎn):

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶,內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

水溶解試驗(yàn):合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:白色或微粉紅色結(jié)晶粉末。水溶性試驗(yàn):100mg/10ml水
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺 (TMB)是過氧化輕酶的底物。二氨基聯(lián)苯的非制癌替代物。
〖保存〗:2~8℃,避光,遠(yuǎn)離金屬
3,3,5,5-四甲基聯(lián)苯胺終止溶液
〖英文名稱〗:TMB-Stop solution
〖級(jí)別〗:BR
產(chǎn)品描述:Upon addition of stop reagent solution to the reaction mix of peroxidase and TMB substrates. The resulting yellow chromogen is quanittated at 450nm. Stop solution is ordered separay 
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:液體
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗
〖保存〗:2~8℃,避光
異硫酸熒光素
〖英文名稱〗:FITC;Fluorescein isothiocyanate;Fluorescein isothiocyanate isomer I;Fluorescein 5-isothiocyanate 
〖其他名稱〗:異硫酸熒光橙紅;異硫酸熒光黃;異硫酸熒光紅;異硫酸熒光素酯;異硫酸熒光素異構(gòu)體I;5-異硫酸熒光素;熒光素-5-異青酸酯;異硫酸熒光酯異構(gòu)體;異硫酸熒光素(同分異構(gòu)體I);熒光素5-異硫酸鹽
〖CAS號(hào)〗:3326-32-7 
C21H11NO5S=389.38
〖級(jí)別〗:人玻連蛋白    一站式 miRNA 尿素 -PAGE 電泳套裝
葡激酶    一站式 PCR-SSCP 套裝
PreScissiom 蛋白酶    一站式 RNA 電泳套裝
可逆性銅染試劑盒    一站式 SDS-PAGE 電泳套裝
可逆性鋅染試劑盒    一站式 TA 克隆試劑盒
糖蛋白 PAGE 染液    一站式 TA 克隆試劑盒 ( 含感受態(tài) )
脂蛋白 PAGE 染液    一站式 Tricine-SDS-PAGE 套裝
一站式乙酸 - 尿素 PAGE 電泳套裝    一站式 Western 印跡套裝 (AP 顯色法 )
免疫蛋白清除劑    一站式 Western 印跡套裝 (HRP 顯色法 )
磷酸化蛋白純化試劑盒    一站式磁珠法動(dòng)物 mRNAout
糖蛋白蛋白純化試劑盒    一站式磁珠法全血 mRNA 提取試劑盒
脂蛋白純化試劑盒    一站式磁珠法真菌 mRNA 提取試劑盒
植物線粒體總蛋白提取試劑盒    一站式磁珠法植物 mRNAout
植物葉綠體蛋白提取試劑盒    一站式大提柱式 miRNAout
石蠟包埋組織蛋


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