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真菌種屬鑒定 PCR Mix 1100 次實驗步驟

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更新時間:2017-01-19 16:31:25瀏覽次數:360次

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產品簡介

真菌種屬鑒定 PCR Mix 1100 次實驗步驟運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

真菌種屬鑒定 PCR Mix 1100 次實驗步驟產品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
真菌種屬鑒定 PCR Mix 1100 次實驗步驟合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

〖干燥失重〗:≤0.50%
〖熔點〗:168~171℃
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:白色或米黃色結晶粉末,對濕和光敏感,有刺激性。一種檢測過氧化輕或過氧化物酶活性的色原試劑,當加入過氧化輕或過氧化物酶時其無色水溶液變成藍綠色(zui大吸收波長在655nm)。溶解于氯方和熱的甲醇,不溶于水
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)過氧化物酶的染色劑。是一種新型安全的色原試劑。與傳統的色原試劑聯苯胺、鄰聯甲苯胺及鄰苯二胺等相比較,TMB具有檢測靈敏度高、穩定性好等優點,而且使用安全。經動物試驗和Ames細菌自動變異性試驗結果表明,TMB為非致癌物和非致突變物。
〖保存〗:2~8℃,避光,遠離金屬
3,3,5,5-四甲基聯苯胺鹽酸鹽
〖英文名稱〗:TMB?2HC1;3,3,5,5-Tetramethyl benzidine dihydrochloride;4,4'-Diamino-3,3',5,5'-tetramethylbiphenyl dihydrochloride 
〖其他名稱〗:TMB鹽酸鹽;3,3,5,5-四甲基聯苯胺鹽酸鹽;二鹽酸3,3',5,5'-四甲基聯苯胺
〖CAS號〗:64285-73-0
C16H20N2?2HC1=313.27
〖級別〗:BR 
〖含量〗:≥98.0%
〖熔點〗:≥300℃
Conjugation grade

φX174RF Ⅱ DNA    一管式植物 DNAout
DAPI 干粉    一氧化氮合成酶測試盒
碘化丙啶干粉    一氧化氮檢測試劑盒 ( 化學法 )
Hoechst33258 干粉    一氧化氮檢測試劑盒 ( 硝酸還原酶法 )
Hoechst33342 干粉    一站式 Blue Native PAGE 電泳套裝
WST-1 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒    一站式 CTAB-PAGE 電泳套裝
Furin 蛋白酶    一站式 DNA 非變性 PAGE 電泳套裝
二硫鍵異構酶,人    一站式 DNA 尿素 -PAGE 電泳套裝
超氧化物歧化酶,人    一站式 GST 標記蛋白質微量純化套裝
硫氧還蛋白    一站式 GST 標記蛋白質微量純化套裝
一站式 MBP 標簽蛋白純化套裝    一站式 His 標記蛋白質微量純化套裝
SUMO 蛋白酶    一站式 His 標記蛋白質微量純化套裝
TEV 蛋白酶    一站式 MBP 標簽蛋白純化套裝
白提取試劑盒


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