真菌種屬鑒定 PCR Mix 7100 次實驗方法產品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶，內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提 供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
真菌種屬鑒定 PCR Mix 7100 次實驗方法合成建文庫用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶（含 RI），反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶（含 RI），反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現 1.1Kb 的片段（如果使用隨機引物，將出現多個小片段）。
〖英文名稱〗：Bisbenzimide H 33342 trihydrochloride；HOE 33342；Hoechst 33342
〖其他名稱〗：赫斯特熒光燃料33342；熒光染料H33342；雙苯并咪唑H33342三鹽酸鹽
〖CAS號〗：23491-52-3
C27H28N6O ? 3HCl ? xH2O=561.93 (anhydrous basis)
〖級別〗：BioChemika
〖含量〗：≥98% (HPLC)
溶解性：Clear to very slightly hazy yellow to brown solution at 50mg plus 1ml of water
水分：≤16.1% (6moles/mole)
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：黃色或黃綠色粉末，溶于水
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)細胞遺傳學研究的常用試劑，熒光染色細胞的DNA ，插入DNA的A-T區,具有低的細胞毒性,形成膜滲透性熒光DNA鏈
〖保存〗：-20℃
熒光素
〖英文名稱〗：Fluorescein；Diresorcinolphthalein；Dihydroxyfluorane；Tetraoxyphthalophenonean hydride；C.I. 45350
〖其他名稱〗：熒光紅；熒光黃；熒光橙紅；酸性黃73；螢光素；螢光紅；螢光黃；2-(6-羥基-3-氧代-3H-呫噸-9-基)苯甲酸；熒光橙；螢光橙黃；熒光酯
*糖基化酶抑制劑 星形細胞生長因子
Afu * -DNA 糖基化酶 胸腺嘧啶
人類單鏈選擇性單功能* -DNA 糖基化酶 胸腺嘧啶核苷
DNA 促旋酶 (E.coli) 溴酚藍
GpC 甲基轉移酶 (M.CviPI) 溴化乙錠 (EB)
熱敏磷酸酶 溴化乙錠干粉 (EB)
無機焦磷酸酶，熱穩定 溴化乙錠清除劑
無機焦磷酸酶 ( 酵母 ) 溴化乙錠溶液 ,10 mg/mL
三磷酸腺苷雙磷酸酶 溴甲酚綠
ATP 硫酸化酶 溴甲酚紫
RecA 蛋白 雪旺細胞生長因子
RecA 蛋白 血清白蛋白清除劑
Tth RecA 蛋白 血液 DNAout
帽結構類似物
