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草桿菌 PCR Mix 4100 次實(shí)驗(yàn)方法

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更新時間：2017-01-19 16:38:20瀏覽次數(shù)：429次

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產(chǎn)品簡介

草桿菌 PCR Mix 4100 次實(shí)驗(yàn)方法運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

草桿菌 PCR Mix 4100 次實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品及特點(diǎn):

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

草桿菌 PCR Mix 4100 次實(shí)驗(yàn)方法合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個小片段）。

蘇丹Ⅳ
〖英文名稱〗：Sudan Ⅳ；Sudan red BB；Scarlet red；Solvent red 24；Oil red Ⅳ；Biebrich scarlet Rfat solube；Fat ponceau；o-Tolylazo-tolylazo-β-naphthol ；C.I. 26105
〖其他名稱〗：蘇旦IV；四號蘇丹紅；猩紅；鄰甲苯偶氮鄰甲苯偶氮-3-萘酚；油溶暗紅；溶劑紅24；蘇丹紅B ；1-[4-(鄰甲苯偶氮)鄰甲苯偶氮]-2-萘酚；1-(2-甲基-4-(2-甲基苯基偶氮)苯基偶氮)-2-萘酚；鄰甲苯偶氮鄰甲苯偶氮-2-萘酚；油溶紅；燭紅
〖CAS號〗：85-83-6
C24H20N4O=380.45
〖級別〗：BS
生物染色試驗(yàn)：合格
〖熔點(diǎn)〗：186～192℃
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：深棕色粉末。無氣味。在175℃時軟化結(jié)塊，在181～188℃熔融分解，260℃全部分解。1g溶于15ml氯方，易溶于苯，溶于油、脂肪、石蠟油、*，微溶于乙醇和丙同，幾乎不溶于水。在醇或苯中呈微紫紅色溶液，醇溶液遇氫氧顯紅紫色，硫酸中顯藍(lán)綠色，稀釋則生成紅色沉淀
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)油和脂肪染色，蘇丹Ⅳ可以用油紅O代替，高溫溫度計(jì)用色
〖保存〗：RT
蘇丹Ⅲ
〖英文名稱〗：Sudan Ⅲ；Fat ponceau G；Sudan red；Cerasin red；Oil red；Solvent red 23；Tony red；Tetraazobenzene-β-naphthol, 1-(p-Phenylazophenylazo)-2-naphthol；Sudan red BK
〖其他名稱〗：三號蘇丹紅；黃光油溶紅；油紅；苯基偶氮（4-偶氮-1）-2-萘酚；蘇旦Ⅲ；蘇丹紅Ⅲ；1-[4-(苯基偶氮)苯基偶氮]-2-萘酚；溶劑紅23；苯偶氮苯偶氮-2-萘酚；透明紅HRR
〖CAS號〗：85-86-9
C22H16N4O=352.39
〖級別〗：BS
生物染色試驗(yàn)：合格
吸收光譜試驗(yàn)：合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：紅棕色粉末。易溶于苯，溶于氯方、冰乙酸、乙迷、乙醇、丙同、石油醚、不揮發(fā)油、熱甘油和揮發(fā)油，不溶于水。〖熔點(diǎn)〗 195℃。zui大吸收波長 507(354)nm。

小鼠抗 E2 標(biāo)簽單抗   小鼠白細(xì)胞分離液 1.093
小鼠抗 S1 標(biāo)簽單抗   小鼠單核細(xì)胞分離液 1.090
小鼠抗 Tag-100 標(biāo)簽蛋白單抗   小鼠基因組 DNA
小鼠抗 HPC4 標(biāo)簽蛋白單抗   小鼠抗 CBP 標(biāo)簽單抗
小鼠抗 SUMO 標(biāo)簽蛋白單抗   小鼠抗 c-Myc 標(biāo)簽單抗
小鼠抗 SUMO 標(biāo)簽蛋白單抗   小鼠抗 c-Myc 標(biāo)簽單抗
HRP 標(biāo)記內(nèi)參抗體 (β-actin)   小鼠抗 E2 標(biāo)簽單抗
HRP 標(biāo)記內(nèi)參抗體 (GAPDH)   小鼠抗 Flag 標(biāo)簽單抗
HRP 標(biāo)記內(nèi)參抗體 (β-Tubulin)   小鼠抗 Flag 標(biāo)簽單抗
雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒   小鼠抗 GFP 標(biāo)簽單抗
熒光染色細(xì)胞凋亡檢測試劑盒   小鼠抗 GFP 標(biāo)簽單抗
離液 1.128