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高 GC 革氏陽性細菌 PCR Mix 5100 次原理

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產(chǎn)品型號

品       牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

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更新時間:2017-01-19 16:38:56瀏覽次數(shù):456次

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產(chǎn)品簡介

高 GC 革氏陽性細菌 PCR Mix 5100 次原理運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

高 GC 革氏陽性細菌 PCR Mix 5100 次原理合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)R坏?RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
高 GC 革氏陽性細菌 PCR Mix 5100 次原理按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現(xiàn)多個小片段)。

產(chǎn)品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶,內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標記等。

水中溶解性試驗:合格
層析試驗:合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:黃色或橄欖綠色粉末,溶于水。商品常為較穩(wěn)定的氯化〖鋅〗復(fù)鹽
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)生物染色劑,組織化學研究用
〖保存〗:-20℃,避光
氨基10B
〖英文名稱〗:Amino black 10B;Buffalo black NBR;Acid black 1 
〖其他名稱〗:萘酚藍;水牛NBR;酸性1;苯胺藍;酸性10B;酸性藍10B;酸性青光藍10B;4-氨基-5-羥基-3-(對硝基苯偶氮)-6-(苯偶氮)-2,7-萘二磺酸二鈉鹽;萘藍;對硝基苯偶氮-3,6-二磺酸-1-氨基-8-萘酚-7-偶氮苯鈉鹽
〖CAS號〗:1064-48-8 
C22H14N6Na2O9S2=616.49
〖級別〗:AR
〖含量〗:≥80%
Lambda Max(nm):616~620
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:藍色或褐色粉末。溶于水(呈藍色)、乙醇(呈深藍色)和溶纖劑(二乙醇一乙迷),微溶于丙同,不溶于其他有機溶劑。遇濃硫酸顯藍綠色,經(jīng)稀釋成深綠藍色沉淀。遇濃硝酸顯深綠色溶液。與10%氫氧溶液顯紅色熒光的藍色溶液。水溶液加入濃鹽酸生成綠藍色沉淀,加入濃氫氧溶液成藍色沉淀。染色時,遇銅;〖鐵〗離子,其色澤前者微有變化,后者略帶淺綠
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)電泳試劑,用于對聚丙烯酰胺凝膠、瓊脂糖凝膠和硝酸纖維素膜上蛋白質(zhì)的染色。在電泳后,*固定蛋白質(zhì)在膠上。膠用 0.1% 氨基10B的7% (v/v) 醋酸溶液染至少2 小時,然后用7% (v/v) 醋酸溶液脫色。檢測靈敏度大概是考馬斯亮藍R250的20%。氧化還原指示劑
〖保存〗:RT

小鼠抗 V5 標簽單抗    腺嘌呤
小鼠抗 MBP 標簽單抗    腺嘌呤硫酸鹽
小鼠抗 MBP 標簽單抗    消解酶 ( 溶細胞酶 ) 干粉
小鼠抗 GFP 標簽單抗    硝苯吡啶
小鼠抗 GFP 標簽單抗    硝酸纖維素膜,13×20cm
小鼠抗 mCherry 標簽單抗    硝酸纖維素膜,13×20cm
小鼠抗 mCherry 標簽單抗    *
小鼠 RFP 標簽單抗    小 RNA 克隆試劑盒
小鼠 RFP 標簽單抗    小膠質(zhì)細胞生長因子
小鼠抗 VSV-G 標簽單抗    小牛胸腺 DNA
小鼠抗 T7 標簽單抗    小牛胸腺 DNA 溶液
小鼠抗 T7 標簽單抗    小鼠 NK 細胞分離液 1.076
小鼠抗 CBP 標簽單抗    小鼠 RFP 標簽單抗
小鼠抗 HSV 標簽單抗


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