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閱讀：3784發(fā)布時間：2020-6-28
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。 當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。當(dāng)用預(yù)先固化在argarose beads上的蛋白質(zhì)A的抗體免疫沉淀A蛋白，那么與A蛋白在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離，對B蛋白進行檢測，進而證明兩者間的相互作用。 這種方法得到的目的蛋白是在細(xì)胞內(nèi)與興趣蛋白天然結(jié)合的，符合體內(nèi)實際情況，得到的結(jié)果可信度高。這種方法常用于測定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。 原理： 當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。當(dāng)用預(yù)先固化在Argarose Beads上的蛋白質(zhì)A的抗體免疫沉淀A蛋白，那么與A蛋白在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離，對B蛋白進行檢測，進而證明兩者間的相互作用。 這種方法得到的目的蛋白是在細(xì)胞內(nèi)與興趣蛋白天然結(jié)合的，符合體內(nèi)實際情況，得到的結(jié)果可信度高。這種方法常用于測定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
優(yōu)點： （1）相互作用的蛋白質(zhì)都是經(jīng)翻譯后修飾的，處于天然狀態(tài)； （2）蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進行的，可以避免人為的影響； （3）可以分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物。 缺點： （1）可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用； （2）兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能不是直接結(jié)合，而可能有第三者在中間起橋梁作用； （3）必須在實驗前預(yù)測目的蛋白是什么，以選擇后檢測的抗體，所以，若預(yù)測不正確，實驗就得不到結(jié)果，方法本身具有冒險性。 （4）靈敏度沒有親和色譜高。 常見問題：在免疫沉淀實驗后的WB驗證環(huán)節(jié)中，當(dāng)使用常規(guī)的 Anti-IgG (H+L) 酶標(biāo)二抗時，通常會出現(xiàn)對應(yīng)免疫沉淀一抗的重鏈（50 kDa）和輕鏈（25 kDa）的兩條帶。如果檢測的目的蛋白分子量在50 kDa或者25 kDa附近時，就會受到這兩條帶的干擾。 Abbkine解決方案：產(chǎn)生此問題的重點在于實驗中目的蛋白的信號模糊，無法進行判斷，那就需要在根本上將干擾的信號降到低，而IPKine系列二抗經(jīng)過特別設(shè)計和優(yōu)化，可以和重/輕鏈特異性結(jié)合從而明顯看到目的蛋白信號。如果目的條帶在55kDa左右，可以通過選擇與輕鏈特異性結(jié)合的二抗，來消除重鏈條帶對目的蛋白檢測的干擾。如下圖：
IPKine山羊抗小鼠IgG輕鏈二抗 消除重鏈干擾，貨號：A25012 IPKine小鼠抗兔IgG輕鏈二抗 消除重鏈干擾，貨號：A25022 IPKine山羊抗小鼠IgG重鏈二抗 消除輕鏈干擾，貨號：A25112 IPKine山羊抗兔IgG重鏈二抗 消除輕鏈干擾，貨號：A25222 IPKine是一系列新型的二抗產(chǎn)品，能有效解決IP-WB后的輕/重鏈干擾問題。IPKine系列二抗經(jīng)過特別優(yōu)化，不會與IgG的輕/重鏈分子結(jié)合，只識別IgG分子的重/輕鏈部分，從而能有效解決IP實驗后的WB檢測中面臨的輕/重鏈干擾信號降到低。 另外，IPKine系列二抗經(jīng)過特別優(yōu)化，其針對目的種屬的特異性非常高，同時針對其他非目的種屬的抗體分子的非特異性結(jié)合降到低，從而有效避免了二抗與樣本內(nèi)免疫球蛋白分子的非特異性雜交，提高實驗的特異性和信噪比。 特點與優(yōu)勢： 1，小包裝即用型試劑，性價比高； 2，更干凈的背景，更清晰的條帶，卓丨越的信噪比； 3，完美避免抗體重鏈或者輕鏈的干擾問題； 4，使用簡便，無需額外的試劑和操作步驟； 5，經(jīng)特殊優(yōu)化，與其它種屬的IgG分子的交叉反應(yīng)極低。 |
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