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武漢艾美捷科技有限公司
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閱讀：115發(fā)布時(shí)間：2020-6-30
離子探針提供了一種將離子通道激活與細(xì)胞內(nèi)離子濃度的后續(xù)變化測定相關(guān)的方法。用這些類型的探針測量的離子豐度變化同時(shí)也反映了細(xì)胞的膜電位的變化，好用的離子探針，可有效地測量離子。
鈣可作為多種細(xì)胞中的通用第二信使，Ca 2+調(diào)節(jié)所有類型細(xì)胞的許多功能，因此鈣測量對于各種生物學(xué)研究至關(guān)重要。在1980年代，Tsien及其同事生產(chǎn)了各種熒光指示劑。其中Indo-1，F(xiàn)ura-2，F(xiàn)luo-3和Rhod-2是測量Ca 2+濃度的*有價(jià)值的染料。近年來，我們陸續(xù)推出了更優(yōu)秀的鈣離子探針：Fluo-8 ®，Cal-520 ® 和Calbryte™520，這些為實(shí)現(xiàn)高通量監(jiān)測鈣濃度，篩選GPCR和鈣離子通道藥物篩選提供了有力的工具。
*常見的可見光激發(fā)的鈣離子探針有Fluo-8 ®，的Fluo-4，F(xiàn)luo- 3，RHOD-2和RHOD-4。Fluo- 8®指示劑廣泛用于流式細(xì)胞術(shù)，共聚焦激光掃描顯微鏡以及高通量篩選GPCR靶標(biāo)。FLUO-8 ®是基本上無熒光的，除非與Ca2+結(jié)合至，此時(shí)量子產(chǎn)率為?0.15以及在飽和Ca2+存在條件下Kd為的390nm。Cal-520®是迄今為止*佳的488 nm處激發(fā)綠色熒光鈣離子指示劑，具有顯著改善的信號/背景比和細(xì)胞內(nèi)保留的特征。
長波長的Rhod-4™，Cal-590™和Cal-630™是綠色熒光Fluo-8®，Fluo-4和Fluo-3的Ca 2+指示劑，可用于存在高水平的自體熒光的細(xì)胞和組織中進(jìn)行鈣定量。Rhod-5N對Ca 2+的結(jié)合親和力低于任何其他基于BAPTA的指示劑（Kd =?320 µM），適用于10 µM至1 mM范圍內(nèi)的Ca 2+測量。像母體Rhod-2指示劑一樣，Rhod-5N在不存在二價(jià)陽離子的情況下基本上是無熒光的，并且在結(jié)合Ca 2+時(shí)顯示出強(qiáng)的熒光增強(qiáng)，沒有光譜偏移。所有Fluo，Cal和Rhod指示劑均可作為不滲透細(xì)胞的鉀鹽或可滲透細(xì)胞的AM酯使用。
優(yōu)秀的單波長鈣指示劑
Cal-500 單波長鈣指示劑，貨號：AAT-20412
經(jīng)典的單波長鈣指示劑
Cal Green 1 單波長鈣指示劑，貨號：AAT-20502
比例離子探針或雙波長離子指示劑是熒光染料的一個(gè)子類別，其用于定量測量細(xì)胞內(nèi)離子濃度。與單波長指示器相比，雙波長指示器具有*的光譜特性，這些光譜特性是由于結(jié)合其目標(biāo)離子而觸發(fā)的。在比例鈣指示劑的情況下，當(dāng)這些染料與游離的Ca 2+結(jié)合時(shí)，它們的*大吸收和發(fā)射波長都會(huì)發(fā)生變化，例如，雙重激發(fā)的Ca2+指示劑在結(jié)合或不結(jié)合Ca 2+時(shí)會(huì)顯示不同的兩個(gè)*大激發(fā)波長（Em），使用從收集的熒光數(shù)據(jù)得出的比率，研究人員可以準(zhǔn)確確定細(xì)胞內(nèi)Ca 2+的濃度。
熒光比值型鈣指示劑
鈣離子熒光探針Quin-2 AM，貨號：AAT-21050
比值型熒光探針進(jìn)行定量，減少了染料負(fù)載導(dǎo)致的指示不均勻，不良的染料保留和光漂白的影響。自1985年Tsien及其合作者引入比例計(jì)量指標(biāo)以來，無數(shù)科學(xué)論文都引用了比例指標(biāo)，這些指標(biāo)有助于研究鈣在細(xì)胞調(diào)節(jié)中的作用（Grynkiewicz等人1985）。
水母發(fā)光蛋白復(fù)合物由22,000Da的載水母發(fā)光蛋白，分子氧和發(fā)光體腔腸素組成。當(dāng)三個(gè)Ca 2+離子與該絡(luò)合物結(jié)合時(shí)，腔腸素被氧化為腔腸酰胺，并伴隨釋放出二氧化碳和藍(lán)光。水母發(fā)光蛋白的生物發(fā)光對Ca 2+濃度的依賴性使得可以在0.1 µM至> 100 µM的檢測范圍內(nèi)測量Ca 2+濃度。與熒光Ca 2+指示劑不同，檢測Ca 2+結(jié)合的水母發(fā)光蛋白，無需照亮樣品，從而消除了自發(fā)熒光的干擾。
發(fā)光鈣檢測：腔腸素及其衍生物
鈣離子熒光探針腔腸素，超級純，貨號：AAT-21156
除了天然腔腸素，我們還提供了一些腔腸素的衍生物，這些衍生物賦予不同的Ca 2+水母發(fā)光蛋白復(fù)合物的親和力和光譜性質(zhì)。據(jù)報(bào)道，腔腸素hcp重組載脂蛋白總體上具有*佳的發(fā)光，同時(shí)具有高量子產(chǎn)率和快速響應(yīng)時(shí)間。但是，腔腸素類似物在細(xì)胞內(nèi)重建水母發(fā)光蛋白可能相對較慢。含有腔腸素的cp，f或h形式的水母發(fā)光蛋白的發(fā)光強(qiáng)度比用天然腔腸素重構(gòu)的載脂蛋白的發(fā)光強(qiáng)度強(qiáng)10至20倍，腔腸素 h主要用于GPCR的HTS篩選測定中。
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