人干擾素α21(IFNα21)測定試劑盒ELISA
中文名稱:人干擾素α21(IFNα21)測定試劑盒
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人干擾素α21(IFNα21)測定試劑盒水平。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入,再與HRP標記的結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中的濃度。
洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟,但卻也決定著實驗的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來。可以說在ELISA操作中,洗滌是zui主要的關鍵技術,應引起操作者的高度重視,操作者應嚴格按要求洗滌,不得馬虎。洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動洗滌儀外,手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種,過程如下:(1)浸泡式 a.吸干或甩干孔內反應液b.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去)c.浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置1-2分鐘,間歇搖動,浸泡時間不可隨意縮短d.吸干孔內液體。吸干應*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干e.重復操作c和d,洗滌3-4次(或按說明規(guī)定)。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時間。微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質的結合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團,也含親水基團,其疏水基團與蛋白質的疏水基團借疏水鍵結合,從而削弱蛋白質與固相載體的結合,并借助于親水基團和水分子的結合作用,使蛋白質回復到水溶液狀態(tài),從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。(2)流水沖洗式 流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時附接一特殊裝置,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗,持續(xù)沖洗2分鐘后,吸干液體,再用蒸餾水浸泡2分鐘,吸干即可。浸泡式猶如盆浴,流水沖洗式則好比淋浴,其洗滌效果更為*,且也簡便、快速。已有實驗表明,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時設法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,洗滌效果更佳。
優(yōu)質的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異,國內醫(yī)學檢驗一般均用板式點。本文將敘述板式ELISA各個操作步驟的注意要點,珠式、管式及磁性球ELSIA,國外試劑均與特殊儀器配合應用,兩者均有詳細的使用說明,嚴格遵照規(guī)定操作,必能得出準確的結果。
相關指標:
牛70kDa熱休克蛋白1B(HSPA1B)測定試劑盒Bos taurus; Bovine (Cattle) Heat Shock 70kDa Protein 1B (HSPA1B)
小鼠Cereblon蛋白(CRBN)測定試劑盒Mus musculus (Mouse) Cereblon (CRBN)
人干擾素α21(IFNα21)測定試劑盒
人角蛋白19(KRT19)測定試劑盒Homo sapiens (Human) Keratin 19 (KRT19)
人絲抑蛋白(Maspin)測定試劑盒Homo sapiens (Human) Maspin
小鼠白細胞彈性蛋白酶抑制因子(LEI)測定試劑盒Mus musculus (Mouse) Leukocyte Elastase Inhibitor (LEI)
人抗IgA抗體(Anti-IgA)測定試劑盒Homo sapiens (Human) Anti-IgA Antibody
人硫酸肝素-2-O-磺基轉移酶1(HS2ST1)測定試劑盒Homo sapiens (Human) Heparan Sulfate-2-O-Sulfotransferase 1 (HS2ST1)
小鼠載脂蛋白A5(APOA5)測定試劑盒Mus musculus (Mouse) Apolipoprotein A5 (APOA5)
人腎上腺素能受體β激酶1(ADRβK1)測定試劑盒Homo sapiens (Human) Adrenergic Receptor Beta Kinase 1 (ADRbK1)
小鼠心肌肌鈣蛋白T(TNNT2)測定試劑盒Mus musculus (Mouse) Troponin T Type 2, Cardiac (TNNT2)
小鼠轉鐵蛋白受體(TFR)測定試劑盒Mus musculus (Mouse) Transferrin Receptor (TFR)