ELISA是以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。
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豬27kDa熱休克蛋白(HSPB1)檢測盒
Pig Heat Shock 27kDa Protein 1 (HSPB1) ELISA
1.2.2 抗體的產生 機體受抗原刺激后,B淋巴細胞產生相應的抗體。含有抗體的血清稱為抗血清(antiserum)。每一系B細胞只產生針對某一抗原決定簇的抗體。如將多種抗原或含有多個抗原決定簇的抗原注入機體,則將由多系的B細胞產生相應的多種抗體,這些抗體均存在于免疫血清中。免疫測定中所用的抗血清一般用抗原免疫兔、羊或馬制得。產生抗體的B細胞可在體外與繁殖力強的腫瘤細胞融合成雜交瘤細胞。將單個雜交瘤細胞分離,在體內或體外培養而分泌的抗體單克隆抗體(monoclonal antibody,McAb或Mab)。單克隆抗體僅針對一種抗原決定簇,具有很高的特異性。單克隆抗體通常用抗原免疫小鼠制備。將免疫的脾細胞(含產生抗體的B細胞)與小鼠腫瘤細胞融合,分離雜交瘤細胞,接種于小鼠腹腔,產生的腹水中含有濃度很高的單克隆抗體。1.3 抗原抗體反應1.3.1 可逆性 抗原與抗體結合形成抗原抗體復合物的過程是一種動態平衡,其反應式為:Ag+Ab→Ag·Ab。.抗體的親和力(affinity)是抗原抗體間的固有結合力,可以平衡常數K表示:K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab]。Ag·Ab的解離程度與K值有關。高親和力抗體的抗原結合點與抗原的決定簇在空間構型上非常適合,兩者結合牢固,不易解離。解離后的抗原或抗體均能保持原有的結構和活性,因此可用親和層析法來提純抗原或抗體。在抗血清中,特異性的IgG抗體僅占總IgG中的極小部分。用親和層析法提取的特異性抗體,稱為親和層析純抗體,應用于免疫測定中可得到更好的效果。1.3.2 zui適比例 在恒定量的抗體中加入遞增量的抗原形成抗體復合物(沉淀)的量見圖1-4。曲線的高峰部分是抗原抗體比例zui合適的范圍,稱為等價帶(zone of equivalence)。在等價帶前后分別為抗體過剩帶和抗原過剩帶。如果抗原或抗體極度過剩,則無沉淀物形成,在免疫測定中稱為帶現象(zone phenomenon)。抗體過量稱為前帶(prezone),抗原地過量稱為后帶(postzone)。在用免疫學方法測定抗原時,應使反應系統中有足夠的抗體量,否則測得的量會小于實際含量,甚至出現假陰性。
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