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北京方程嘉鴻科技有限公司
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ELISA是以免疫學反應為基礎,將抗原、牽9體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應物,從而保證試驗結果的特異性與穩定性。在實際應用中,通過不同的設計,具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法(圖a)、用于檢測抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。實驗新手講解自己的ELISA操作流程,您沒見過吧,本章就由我司一個客戶朋友親身講講他自己的實驗經歷。讓我們一起閱讀!給師弟科普ELISA基本步驟。與其寫個文檔,不如直接寫帖子,反正工作量一樣。我自己做ELISA也只是初學者,所以說得不對的地方,請大家多多指正。ELISA有白底(上圖,不可拆)和黑空板子(可拆,8個一排,12排)。用吸光度(一般是450nm的OD值)來檢測,就只能用白底的板子。黑底的板子可以用Lumin讀數。步,拿到板子,還有封蓋膜。第二步:用100ul包被抗體,包被好板子之后,輕彈混勻。將封蓋膜的白色撕去,用透明有粘性的膜,貼在板子上,把膜壓緊(貼膜是為了防止液體揮發,所以一定要把每孔黏牢)。室溫孵育過夜。注意事項:1.如果一次只做一部分孔,貼膜可以剪刀剪開,只用一部分。保證膜可以把加液后的孔蓋住就可以。2.加樣時候,一定要保證每孔加樣量*一樣。避免因為操作原因,每孔液體量有區別。ELISA比較敏感,操作誤差會導致zui后讀數有不小的差別。3.加的樣,保證樣品加在孔底,不要粘在管壁上,減少孔與孔之間的差異。第二天早上,來洗掉包被液。
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