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即用型評板培養基標準操作要點

閱讀:122發布時間:2018-04-02

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即用型評板培養基標準操作要點
1. 標本的采取和保存
大部分ELISA 檢測均以血清為標本。血清標本可按常規方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質,以HRP 為標記的ELISA 測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP,也會產生假陽性反應。一般說來,在5 天內測定的血清標本可放置于4℃,標本在冰箱中保存時間過長導致血清IgG 聚合,使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需-20℃保存。凍結血清融解后,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻并避免產生氣泡?;鞚峄蛴谐恋淼难鍢吮緫入x心或過濾,澄清后再檢測。反復凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應注意無菌操作,也可加入適當防腐劑??鼓?的標本因纖維蛋白原的干擾而造成假陽性,建議盡量不用抗凝血尤其是肝素抗凝劑。
2.加樣
加樣時應將所加物加在ELISA 板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出。
3.保溫
在建立ELISA 方法作反應動力學研究時,實驗表明,兩次抗原抗體反應一般在37℃經
1-2 小時,產物的生成可達。為避免蒸發,板上應加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,反應板不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。應注意溫育的溫度和時間應按規定力求準確。由于公司的試劑盒溫育是在空氣浴中完成,采用水浴會造成值偏高或花板。另外溫育中還有邊緣效應,邊上的值會偏高,建議為了客觀的判斷結果,將質控放在非邊緣位置。
4.洗滌
洗滌在ELISA 過程中雖不是一個反應步驟,但卻決定著實驗的成敗。ELSIA 就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,而在洗滌時應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來。可以說在ELISA 操作中,洗滌是zui主要的關鍵技術,應引起操作者的高度重視,操作者應嚴格按要求洗滌,不得馬虎。
洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質的結合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團,也含親水基團,其疏水基團與蛋白質的疏水基團借疏水鍵結合,從而削弱蛋白質與固相載體的結合,并借助于親水基團和水分子的結合作用,使蛋白質回復到水溶液狀態,從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。
即用型評板培養基成纖維細胞生長因子7(FGF7)ELISA試劑盒    ,英文名:    FGF7 ELISA Kit
成纖維細胞生長因子5(FGF5)ELISA試劑盒    ,英文名:    FGF5 ELISA Kit
成纖維細胞生長因子3(FGF3)ELISA試劑盒    ,英文名:    FGF3 ELISA Kit
成纖維細胞生長因子21(FGF21)ELISA試劑盒    ,英文名:    FGF21 ELISA Kit
成纖維細胞生長因子19(FGF19)ELISA試劑盒    ,英文名:    FGF19 ELISA Kit
成纖維細胞生長因子18(FGF18)ELISA試劑盒    ,英文名:    FGF18 ELISA Kit
成纖維細胞生長因子17(FGF17)ELISA試劑盒    ,英文名:    FGF17 ELISA Kit
成纖維細胞生長因子13(FGF13)ELISA試劑盒    ,英文名:    FGF13 ELISA Kit
成纖維細胞生長因子12(FGF12)ELISA試劑盒    ,英文名:    FGF12 ELISA Kit
成纖維細胞生長因子11(FGF11)ELISA試劑盒    ,英文名:    FGF11 ELISA Kit
成纖維細胞激活蛋白α(FAPα)ELISA試劑盒    ,英文名:    FAPα ELISA Kit
成神經細胞瘤抑制瘤變蛋白1(NBL1)ELISA試劑盒    ,英文名:    NBL1 ELISA Kit
成肌分化蛋白(MyoD)ELISA試劑盒    ,英文名:    MyoD ELISA Kit
成簇蛋白(TUFT)ELISA試劑盒    ,英文名:    TUFT ELISA Kit
沉默調節蛋白7(SIRT7)ELISA試劑盒    ,英文名:    SIRT7 ELISA Kit
沉默調節蛋白6(SIRT6)ELISA試劑盒    ,英文名:    SIRT6 ELISA Kit
沉默調節蛋白5(SIRT5)ELISA試劑盒    ,英文名:    SIRT5 ELISA Kit
沉默調節蛋白4(SIRT4)ELISA試劑盒    ,英文名:    SIRT4 ELISA Kit
沉默調節蛋白3(SIRT3)ELISA試劑盒    ,英文名:    SIRT3 ELISA Kit
沉默調節蛋白2(SIRT2)ELISA試劑盒    ,英文名:    SIRT2 ELISA Kit
沉默調節蛋白1(SIRT1)ELISA試劑盒    ,英文名:    SIRT1 ELISA Kit
巢蛋白2(NID2)ELISA試劑盒    ,英文名:    NID2 ELISA Kit
巢蛋白(NID)ELISA試劑盒    ,英文名:    NID ELISA Kit
超氧化物歧化酶1(SOD1)ELISA試劑盒    ,英文名:    SOD1 ELISA Kit
常染色體隱性遺傳性耳聾59蛋白(DFNB59)ELISA試劑盒    ,英文名:    DFNB59 ELISA Kit
腸型脂肪酸結合蛋白(FABP2)ELISA試劑盒    ,英文名:    FABP2 ELISA Kit
腸堿性磷酸酶(ALPI)ELISA試劑盒    ,英文名:    ALPI ELISA Kit
叉頭框蛋白P3(FOXP3)ELISA試劑盒    ,英文名:    FOXP3 ELISA Kit
叉頭框蛋白P1(FOXP1)ELISA試劑盒    ,英文名:    FOXP1 ELISA Kit
叉頭框蛋白O3(FOXO3)ELISA試劑盒    ,英文名:    FOXO3 ELISA Kit
叉頭框蛋白O1(FOXO1)ELISA試劑盒    ,英文名:    FOXO1 ELISA Kit
叉頭框蛋白C1(FOXC1)ELISA試劑盒    ,英文名:    FOXC1 ELISA Kit
層粘連蛋白γ3(LAMγ3)ELISA試劑盒    ,英文名:    LAMγ3 ELISA Kit
層粘連蛋白γ2(LAMγ2)ELISA試劑盒    ,英文名:    LAMγ2 ELISA Kit即用型評板培養基

 


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