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上海邦景實業有限公司
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閱讀:97發布時間:2018-05-04
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藥典培養基實驗中常見問題和解決方案
1、石蠟切片和冰凍切片的比較?
(1)要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片,這是今天我向一老師請教得出的結論。因為作石蠟切片時要高溫烤片,可能會破壞組織的抗原性,如果組織的抗原性較穩定,則可作石蠟切片;但是要求做石蠟切片的,可作冰凍切片。
(2)冰凍切片的優點是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性,做免疫組化時不需抗原修復這一步。缺點是細胞內易形成冰晶而破壞細胞結構,可能會使抗原彌散;切片厚度較石蠟的厚,做的片子沒石蠟的漂亮。當你買一抗時,目錄上都寫著做什么樣的切片,如果它寫著只能做冰凍,就不能做石蠟,如寫著兩者都可,那就都能做。
(3)石蠟切片的優點可以保持組織細胞的形態結構,且容易存放在室溫,而冰凍切片比較麻煩,一定要存在-80度的低溫冰箱中,尤其是用來做原位雜交的的切片,為了防止RNA降解,保存一貫很重要。由于石蠟切片可以切到4微米左右,所以原位雜交探針容易滲透到組織中去,容易成功,而且得到的顏色/形態都較冰凍切片好。
2、一抗的選擇要點和技巧是什么?
(1)單克隆和多克隆抗體的選擇。由一種克隆產生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標明確地與單一的特異抗原決定簇結合,就像zi彈地命中目標一樣。另一方面,即使是同一個抗原決定簇,在機體內也可以由好幾種克隆來產生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應中,一般單克隆抗體特異性強,但親和力相對小,檢測抗原靈敏度相對就低;而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強,靈敏度高,但易出現非特異性染色(可以通過封閉等避免)。
(2)應用范圍的選擇。有的一抗只能用于Western Blotting,或免疫組化、免疫熒光、免疫沉淀等;甚至表明石蠟切片或冰凍切片。
(3)種屬反應性的選擇(species reactivity)。這一點很重要,表明這種抗體可能存在種屬差異,且這種抗體適合檢測哪種種屬動物體內的抗原。
(4)種屬來源,一般兔來源的多是多克隆;而小鼠來源的多是單克隆,但也有另外。根據此來源來選擇相應的二抗。
(5)的選擇。如santa Cruz公司抗體一般1ml,價格2100元左右;而chemicon公司一抗一般100ul,價格2800元左右。這兩個的同一種抗體它的實際效價穩定是不同的,我一般用后者抗體做免疫組化效果較好,而前者做Western blotting效果還可以。
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