大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）試劑盒使用說明
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶
（NAG）含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）水
平。用純化的大鼠 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）抗體包被微孔板，制成固相抗體，
往包被單抗的微孔中依次加入 NAG，再與 HRP 標記的 NAG 抗體結合，形成抗體-抗原-酶
標抗體復合物，經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，
并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 NAG 呈正相關。用酶標儀在
450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中大鼠 N-乙酰-β-D-氨基葡萄
糖苷酶（NAG）濃度。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
然后再加待測樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止
液后 15 分鐘以內進中
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶
（NAG）含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）水
平。用純化的大鼠 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）抗體包被微孔板，制成固相抗體，
往包被單抗的微孔中依次加入 NAG，再與 HRP 標記的 NAG 抗體結合，形成抗體-抗原-酶
標抗體復合物，經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，
并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 NAG 呈正相關。用酶標儀在
450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中大鼠 N-乙酰-β-D-氨基葡萄
糖苷酶（NAG）濃度。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
然后再加待測樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止
液后 15 分鐘以內進行。
TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%體積比）
2．抗原修復液（依檢測抗原不同而選擇不同的修復液）
10mM pH6.0 檸檬酸緩沖液
檸檬酸 0.38g
檸檬酸三鈉 2.45g
加蒸餾水 900mL，濃鹽酸調 pH 值至 6.0，后定容至 1000mL
或：0.5M EDTA 修復液（pH8.0）
EDTA·2H2O 186.1g
加蒸餾水 700mL，用 10mM NaOH 調 pH 值至 8.0，后定容至 1000Ml
3. 緩沖甘油封固劑 10 mL
4. Tween 20 5 mL
