【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
1.產(chǎn)品名稱：人肺動脈成纖維細(xì)胞操作步驟
2.組織來源：肺動脈組織
3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
4.細(xì)胞簡介：
人肺動脈成纖維細(xì)胞分離自肺動脈組織；肺動脈亦稱肺動脈干。在呼吸空氣的脊椎動物中，把靜脈血由心臟導(dǎo)向肺臟的動脈。肺大動脈起于右心室，在主動脈之前向左上后方斜行，在主動脈弓下方分為左、右肺動脈，經(jīng)肺門入肺。肺動脈干位于心包內(nèi)，為一粗短的動脈干。起自右心室，在升主動脈前方向左后上方斜行，至主動脈弓下方分為左、右肺動脈。左肺動脈較短，在左主支氣管前方橫行，分二支進(jìn)入左肺上、下葉。右肺動脈較長而粗，經(jīng)升主動脈和上腔靜脈后方向右橫行，至右肺門處分為三支進(jìn)入右肺上、中、下葉。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來；成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的肺動脈成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。肺動脈成纖維細(xì)胞在生理條件下的主要功能包括：構(gòu)造和維持肺動脈的正常形態(tài)；合成和釋放細(xì)胞外基質(zhì)；組織損傷后及時大量聚集修復(fù)損傷組織。
本公司的肺動脈成纖維細(xì)胞采用*-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
5.培養(yǎng)基信息：
DMEM[H]、FBS、成纖維細(xì)胞生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
優(yōu)勢：
1、細(xì)胞株種類齊全，包括腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株，如：人滑膜細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞，人細(xì)胞，人腎近曲小管上皮細(xì)胞，肝癌細(xì)胞，心肌細(xì)胞，子宮內(nèi)膜細(xì)胞等
2、*，專業(yè)的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指導(dǎo)
3、購買本公司的細(xì)胞株，免費(fèi)復(fù)蘇
4、客戶收到細(xì)胞后一天回傳細(xì)胞圖片，三天回傳細(xì)胞生長狀態(tài)圖片，五天內(nèi)有問題公司負(fù)責(zé)重發(fā)，超過五天時限至一個月內(nèi)重發(fā)細(xì)胞收半價，超過一個月重發(fā)全額收費(fèi)。
5、經(jīng)濟(jì)、實惠、可靠，完善、穩(wěn)定的實驗體系，優(yōu)秀的科研隊伍，*的實驗設(shè)備、準(zhǔn)確可靠的實驗結(jié)果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細(xì)胞株、抗體、血清、培養(yǎng)基、常用生化試劑、耗材。
唾液*α1(AMY1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
胰彈性蛋白酶(ELA1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
成骨生長肽(OGP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
白介素1α(IL1α)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
硫氧化還原蛋白(Trx)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
硫氧化還原蛋白(Trx)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
硫氧化還原蛋白(Trx)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
硫氧還蛋白還原酶1(TrxR1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
硫氧還蛋白還原酶1(TrxR1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
硫氧還蛋白還原酶1(TrxR1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
孤啡肽(OFQ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
孤啡肽(OFQ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
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基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
內(nèi)凝集蛋白1(ITLN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
內(nèi)凝集蛋白1(ITLN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
內(nèi)凝集蛋白1(ITLN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
載脂蛋白E(APOE)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
載脂蛋白E(APOE)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
載脂蛋白E(APOE)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
0.5mg
Ferritin peptide 鐵蛋白抗原 ADAMTS8 整合素樣金屬蛋白酶與*8型抗體 0.5mg
Cytochrome C 細(xì)胞色素 C（抗原） PRRSV M protein 豬藍(lán)耳病病毒M蛋白抗體 0.5mg
ADRB3/ Beta3-AR ( Beta3-adrenergic receptor) 腎上腺素能受體β3 CPN10 葉綠體伴侶蛋白抗體（蘋果） 0.5mg
Cytomegalovirus (CMV)PP65 細(xì)胞巨化病毒(多肽) FMDV Polyprotein (3D polymerase) 口蹄疫病毒 0.5mg
DDC (DOPA decarboxylase) 多巴胺脫羧酶（抗原） Clenbuterol Hydrochloride(Spiropent) */瘦肉精抗體 0.5mg
EGFR- V III 人表皮生長因子受體-8（多肽片斷抗原） Chloramphenicol *抗體 0.5mg
Alpha-AF/ Alpha-Afa(alpha-L-arabinofuranosidase) α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗原 ADAR1 (N-terminus) 雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗體（N端） 0.5mg
SCCA peptide 鱗狀細(xì)胞癌抗原 BRLF1 立即早期癌基因BRLF1抗體（鼻咽癌基因） 0.5mg
Endothelin-1 內(nèi)皮素-1(多肽抗原) ADAR1 (C-terminus) 雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗體（C端） 0.5mg
Endothelin-1 (ET-1) 內(nèi)皮素-1（抗原） Ractopamine /PAYLEAN (1B12) 小鼠抗萊克多巴胺單克隆抗體 0.5mg
ERAB 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Aβ相關(guān)結(jié)合蛋白（抗原） Cellulase 纖維素酶 0.5mg
ER-Alpha peptide 雌激素受體（多肽抗原） Pectinesterase 果膠酶抗體 0.5mg
TIMP-1(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-1) 金屬蛋白酶組織抑制因子-1（抗原） DLK1/Delta/DLL1 (C-terminus) 穿膜蛋白DLK1抗體（C端） 0.5mg
ER-Alpha/ Beta Estrpgen Receptor Alpha/ Beta 雌激素受體（抗原） ADD1/alpha Adducin 內(nèi)收蛋白a1抗體 0.5mg
ER- Beta (Estrogen receptor beta)peptide 雌激
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