【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
1.產品名稱：人支氣管成纖維細胞操作步驟
2.組織來源：支氣管組織
3.產品規格：5×10^5cells/T25細胞培養瓶
4.細胞簡介：
人支氣管成纖維細胞分離自支氣管組織；支氣管（Bronchi），是指由氣管分出的各級分枝，由氣管分出的一級支氣管，即左、右主支氣管。左主支氣管與右主支氣管相比較，前者較細長，走向傾斜；后者較粗短，走向較前者略直，所以經氣管墮入的異物多進入右主支氣管。支氣管和氣管還有以區別就是，氣管是以“C”型的氣管軟骨為支架，而支氣管不是。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的支氣管成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。支氣管成纖維細胞在生理條件下的主要功能包括：構造和維持組織的正常形態，合成和釋放細胞外基質以及組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織。
本公司的支氣管成纖維細胞采用膠原酶-*聯合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
5.培養基信息：
DMEM[H]、FBS、成纖維細胞生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。
2、培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
優勢：
1、細胞株種類齊全，包括腫瘤細胞、正常細胞、耐藥細胞株，如：人滑膜細胞，人胃癌細胞，人細胞，人腎近曲小管上皮細胞，肝癌細胞，心肌細胞，子宮內膜細胞等
2、*，專業的細胞培養技術指導
3、購買本公司的細胞株，免費復蘇
4、客戶收到細胞后一天回傳細胞圖片，三天回傳細胞生長狀態圖片，五天內有問題公司負責重發，超過五天時限至一個月內重發細胞收半價，超過一個月重發全額收費。
5、經濟、實惠、可靠，完善、穩定的實驗體系，優秀的科研隊伍，*的實驗設備、準確可靠的實驗結果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細胞株、抗體、血清、培養基、常用生化試劑、耗材。
蛋白*磷酸酶受體R(PTPRR)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) M17923 CLIA Kit for Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 5B (WNT5B) 96T Homo sapiens (Human)
磷脂酰肌醇蛋白聚糖4(GPC4)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) M17924 CLIA Kit for Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 3A (WNT3A) 96T Homo sapiens (Human)
鞘磷脂蛋白0(MPZ)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) M17925 CLIA Kit for Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 3A (WNT3A) 96T Rattus norvegicus (Rat)
天冬氨酸轉氨酶(AST)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) M17926 CLIA Kit for Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 10A (WNT10A) 96T Homo sapiens (Human)
通用轉錄因子ⅡA肽1(GTF2A1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) M17927 CLIA Kit for Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 7B (WNT7B) 96T Homo sapiens (Human)
唾液酸結合Ig樣凝集素12(SIGLEC12)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) M17928 CLIA Kit for Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 7A (WNT7A) 96T Homo sapiens (Human)
細胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) M17929 CLIA Kit for Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 5A (WNT5A) 96T Homo sapiens (Human)
上皮細胞粘附分子(EPCAM)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) M17930 CLIA Kit for Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 5A (WNT5A) 96T Mus musculus (Mouse)
乙酰*羧化酶α(ACACα)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) M17931 CLIA Kit for Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 5A (WNT5A) 96T Rattus norvegicus (Rat)
纖維蛋白肽B(FPB)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
14-3-3 family protein(Malus domestica (Apple) (Malus sylvestris)) 植物14-3-3蛋白抗原 SLC27A5 脂肪酸轉運蛋白5抗體 0.5mg
FRA1/FOSL1 peptide FRA-1多肽蛋白 Clathrin heavy chain/Clathrin HC 網格蛋白重鏈抗體 1mg
AIF (Apoptosis-Inducing Factor) 調亡誘導因子(多肽片斷抗原） RAB-14 RAS相關蛋白癌基因Rab14抗體 0.5mg
Adenylate Kinase 1 (AK-1) 腺苷酸激酶-1 ARHG7 p21活化蛋白激酶ARHG7抗體 0.5mg
Akt/PKB 蛋白激酶B（抗原） TdT/DNTT 末端脫氧核苷酸轉移酶抗體 0.5mg
2,4-D/KLH(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid) 2，4-二氯苯氧乙酸偶聯血藍蛋白 phospho-c-Abl(Thr754) 磷酸化非受體*激酶c-Abl抗體 5mg
2,4-D/BSA 2，4-二氯苯氧乙酸偶聯牛血清白蛋白 FUCA1/Alpha L fucosidase I α-L巖藻糖苷酶抗體 1mg
CA153/MUC1/KL-6 peptide 癌相關抗原 TNFR1/TNF Receptor I 腫瘤壞死因子受體1抗體 0.5mg
ALK (Anaplastic Lymphoma Kinase)(CD246Ag) 間變型淋巴瘤激酶（抗原） HHV8/ORF K14 人類皰疹病毒8 ORF14抗體 0.5mg
5-HT(5-Hydroxy-L-tryptophan/L-5-HTP) 5-羥色胺 SEMA6D 軸突導向因子SEMA6D抗體 20mg
AM (Adrenomedullin; ADM) 腎上腺髓質素（多肽抗原） plant lectin B4/IB4 植物凝集素IB4 0.1mg
5-HTR1A (5-HT1A (5-hydroxytryptamine/serotonin receptor 1A; 5HT1a; ADRBRL1; ADRB2RL1; HTR1A) 5-羥色胺受體1A(多肽) SNX1/Sorting nexin1 分選連接蛋白1抗體 0.5mg
