【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
1.產品名稱：大鼠卵巢成纖維細胞操作步驟
2.組織來源：卵巢組織
3.產品規格：5×10^5cells/T25細胞培養瓶
4.細胞簡介：
大鼠卵巢成纖維細胞分離自卵巢組織；卵巢是雌性動物的器官，卵巢的功能是產生卵以及類固醇激素。卵巢的位置與相同，僅左側發育（右側已退化），呈葡萄狀，均為處于不同發育時期的卵泡，卵泡呈黃色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小與年齡和產卵期有關。大多數脊椎動物有兩個卵巢，但是部分魚類的兩個卵巢融合為單個結構，而所有鳥類只有左側卵巢有機能。卵巢是位于子宮兩側的一對卵圓形的器官，它的外表有一層上皮組織，其下方有薄層的結締組織。卵巢的內部結構可分為皮質和髓質。皮質位于卵巢的周圍部分，主要由卵泡和結締組織構成；髓質位于*，由疏松結締組織構成，其中有許多血管、淋巴管和神經。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來；成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的卵巢成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。卵巢成纖維細胞大多分布于卵巢表面，其主要特點和功能：①成纖維細胞在體外易于培養；②卵巢損傷后，成纖維細胞能修復和重塑卵巢；③能在卵巢炎癥時有效控制炎癥擴散。
本公司的大鼠卵巢成纖維細胞采用*-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
5.培養基信息：
DMEM[H]、FBS、成纖維細胞生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。
2、培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
優勢：
1、細胞株種類齊全，包括腫瘤細胞、正常細胞、耐藥細胞株，如：人滑膜細胞，人胃癌細胞，人細胞，人腎近曲小管上皮細胞，肝癌細胞，心肌細胞，子宮內膜細胞等
2、*，專業的細胞培養技術指導
3、購買本公司的細胞株，免費復蘇
4、客戶收到細胞后一天回傳細胞圖片，三天回傳細胞生長狀態圖片，五天內有問題公司負責重發，超過五天時限至一個月內重發細胞收半價，超過一個月重發全額收費。
5、經濟、實惠、可靠，完善、穩定的實驗體系，優秀的科研隊伍，*的實驗設備、準確可靠的實驗結果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細胞株、抗體、血清、培養基、常用生化試劑、耗材。
V-Rel網狀內皮增生病毒癌基因同源物A(RELA)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) M17386 CLIA Kit for Matrix Metalloproteinase 3 (MMP3) 96T Canis familiaris; Canine (Dog)
纖維膠凝蛋白1(FCN1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) M17387 CLIA Kit for Matrix Metalloproteinase 3 (MMP3) 96T Equus caballus; Equine (Horse)
蛋白激酶Cγ(PKCγ)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) M17388 CLIA Kit for Matrix Metalloproteinase 3 (MMP3) 96T Mus musculus (Mouse)
抗氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) M17389 CLIA Kit for Matrix Metalloproteinase 3 (MMP3) 96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(LOX1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) M17390 CLIA Kit for Matrix Metalloproteinase 3 (MMP3) 96T Rattus norvegicus (Rat)
凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(LOX1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) M17391 CLIA Kit for Matrix Metalloproteinase 3 (MMP3) 96T Oryctolagus cuniculus (Rabbit)
凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(LOX1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) M17392 CLIA Kit for Matrix Metalloproteinase 7 (MMP7) 96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
速激肽受體2(TACR2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) M17393 CLIA Kit for Matrix Metalloproteinase 7 (MMP7) 96T Capra hircus; Caprine (Goat)
*釋放激素(GnRH)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) M17394 CLIA Kit for Matrix Metalloproteinase 7 (MMP7) 96T Equus caballus; Equine (Horse)
Anti-N-ras ECE1(Endothelin Converting Enzyme 1) 內皮素轉化酶1抗原 X57597 0.1ml
Anti-Nrf2 ECE2(Endothelin Converting Enzyme 2) 內皮素轉化酶2抗原 X57598 0.1ml
Anti-NRP-1 ECP(eosinophil cationic protein)mouse rat 嗜酸性粒細胞陽離子蛋白抗原 X57599 0.1ml
Anti-NRP-2 ED-1 (Ectodermal Dysplasia 1) 外胚層發育不良抗原 X57600 0.1ml
Anti-NSBP1 rhEGF(rh-Epidermal growth factor) * X57601 0.2ml
Anti-NSE EGF(Epidermal growth factor)rat 重組表皮生長因子抗原(大鼠) X57602 0.1ml
Anti-NT-3 EGFL7(EGF-like domain containing protein 7) 類表皮生長因子域7抗原 X57603 0.1ml
Anti-NT-4/NT-5 Egr-1(Early growth response 1) 早期反應基因-1/應急反應生長基因1抗原 X57604 0.2ml
Anti-NTN phospho-eIF4E(pSer209)(phospho-Eukaryotic translation initiation factor 4E) 磷酸化eIF-4E（Ser209）抗原 X57605 0.1ml
Anti-Nurr1 ELK1 細胞轉錄因子ELK1抗原 X57606 0.1ml
Anti-OAS1 Elastin 彈性蛋白抗原 X57607 0.2ml
Anti-OAT-1 human ELAVL1/HuR peptide ELAVL1/HuR多肽抗原 X57608 0.1ml
Anti-OAT-3 Emp1 (epithelial membrane protein 1) 表皮膜蛋白1抗原 X57609 0.1ml
Anti-OAT4L/URAT1 sFRP-4(Secreted frizzled-related protein 4; Frizzled protein, human endometrium) 抗子宮內膜抗原 X57610 0.1ml
Anti-OCT1 Endostatin 內皮抑素/內皮他丁抗原 X57611 0.2ml
