【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

1.產(chǎn)品名稱：大鼠軟骨細(xì)胞操作步驟

2.組織來源：軟骨組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠軟骨細(xì)胞分離自軟骨組織；軟骨組織由軟骨細(xì)胞、基質(zhì)及纖維構(gòu)成。軟骨組織再生能力強(qiáng)，這些增生的幼稚細(xì)胞形似纖維母細(xì)胞，以后逐漸變?yōu)檐浌悄讣?xì)胞，并形成軟骨基質(zhì)，細(xì)胞被埋在軟骨陷窩內(nèi)而變?yōu)殪o止的軟骨細(xì)胞。根據(jù)軟骨組織內(nèi)所含纖維成分的不同，可將軟骨分為透明軟骨、彈性軟骨和纖維軟骨三種，其中以透明軟骨的分布較廣，結(jié)構(gòu)也較典型。軟骨細(xì)胞（chondrocyte）位于軟骨陷窩內(nèi)。幼稚的軟骨細(xì)胞位于軟骨組織的表層，單個(gè)分布，體積較小，呈橢圓形，長軸與軟骨表面平行，越向深層的軟骨細(xì)胞體積之間增大呈圓形，細(xì)胞核圓形或卵圓形，染色淺，細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性，常見數(shù)量不一的脂滴。成熟的軟骨細(xì)胞多2-8個(gè)成群分布于軟骨陷窩內(nèi)，這些軟骨細(xì)胞由同一個(gè)母細(xì)胞分裂增殖而成，稱為同源細(xì)胞群。電鏡下，軟骨細(xì)胞有突起和皺褶，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體。在組織切片中，軟骨細(xì)胞收縮為不規(guī)則形，在軟骨囊和細(xì)胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。體外培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

本公司的大鼠軟骨細(xì)胞采用膠原酶-*聯(lián)合消化制備而來，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

5.培養(yǎng)基信息：

DMEM-F12、FBS、軟骨細(xì)胞生長添加劑、Vitamin Supplements、Penicillin、Streptomycin等

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽*儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲(chǔ)存。-20℃不可超過1小時(shí)，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
優(yōu)勢(shì)：
1、細(xì)胞株種類齊全，包括腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株，如：人滑膜細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞，人細(xì)胞，人腎近曲小管上皮細(xì)胞，肝癌細(xì)胞，心肌細(xì)胞，子宮內(nèi)膜細(xì)胞等
2、*，專業(yè)的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指導(dǎo)
3、購買本公司的細(xì)胞株，免費(fèi)復(fù)蘇
4、客戶收到細(xì)胞后一天回傳細(xì)胞圖片，三天回傳細(xì)胞生長狀態(tài)圖片，五天內(nèi)有問題公司負(fù)責(zé)重發(fā)，超過五天時(shí)限至一個(gè)月內(nèi)重發(fā)細(xì)胞收半價(jià)，超過一個(gè)月重發(fā)全額收費(fèi)。
5、經(jīng)濟(jì)、實(shí)惠、可靠，完善、穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)體系，優(yōu)秀的科研隊(duì)伍，*的實(shí)驗(yàn)設(shè)備、準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細(xì)胞株、抗體、血清、培養(yǎng)基、常用生化試劑、耗材。

吸附試驗(yàn)法) M17086 CLIA Kit for Kallikrein 10 (KLK10) 96T Homo sapiens (Human)
半*蛋白酶抑制劑3(CST3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) M17087 CLIA Kit for Kallikrein 10 (KLK10) 96T Mus musculus (Mouse)
C組著色性干皮病偶聯(lián)因子(XPC)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) M17088 CLIA Kit for Kallikrein 10 (KLK10) 96T Rattus norvegicus (Rat)
C組著色性干皮病偶聯(lián)因子(XPC)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) M17089 CLIA Kit for Apolipoprotein E (APOE) 96T Homo sapiens (Human)
骨橋素(OPN)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) M17090 CLIA Kit for Indole 3 Acetic Acid (IAA) 96T General
骨橋素(OPN)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) M17091 CLIA Kit for Complement C3 Convertase (C3c) 96T Homo sapiens (Human)
骨橋素(OPN)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) M17092 CLIA Kit for Lactoferrin (LTF) 96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
骨橋素(OPN)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) M17093 CLIA Kit for Lactoferrin (LTF) 96T Homo sapiens (Human)
α-骨膠原交聯(lián)(αCTx)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) M17094 CLIA Kit for Kidney Injury Molecule 1 (Kim1) 96T Homo sapiens (Human)
α-骨膠原交聯(lián)(αCTx)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) M17095 CLIA Kit for Kidney Injury Molecule 1 (Kim1) 96T Mus musculus (Mouse)
α-骨膠原交聯(lián)(αCTx)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) M17096 CLIA Kit for Kidney Injury Molecule 1 (Kim1) 96T Rattus norvegicus (Rat)

protein-1(CD79A)IGBP-1  免疫球蛋白結(jié)合蛋白-1 X57131  0.1ml
Anti-CDK4    CD133  造血干細(xì)胞抗原CD133 X57132  0.1ml
Anti-CDK5   CD133  造血干細(xì)胞抗原（多肽抗原） X57133  1ml
Anti-CDK6    H5N1-H5  H5亞型全病毒 X57134  0.2ml
Anti-CDK7   Newcastle disease virus  雞新城疫疫苗（雞瘟4型混合病毒） X57135  1ml
Anti-CDK8   SDF-1/CXCL12  基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1 X57136  0.2ml
Anti-Cdkn1c/p57/Kip2    Bacillus anthraci  炭疽桿菌菌體蛋白 X57137  0.2ml
Anti-CDR/YKL-40   ADCY1 peptide  腺苷酸環(huán)化酶1多肽抗原 X57138  0.1ml
Anti-CEA    c-erbB-2蛋白  c-erbB-2蛋白（抗原） X57139  0.2ml
Anti-CEAcam8/CD67    ChAT(Choline Acetyltransferase)  *乙酰轉(zhuǎn)移酶（抗原） X57140  0.2ml
Anti-C-erbB-2   HCLS1  造血干細(xì)胞特異性蛋白 X57141  0.1ml
Anti-C-erbB-4/HER4/erbB-4    ChRM2 (Muscarinic Acetylcholine receptor M2)  毒蕈堿型乙酰*受體（抗原） X57142  0.1ml
Anti-c-fos   C-Peptide( C-PEP )  C-肽（C肽） X57143  0.1ml
anti-CFTR    CR (Calretinin)  鈣結(jié)合蛋白（抗原） X57144  0.1ml
Anti-CGA   CRP (C-reactive protin)  C-反應(yīng)蛋白（抗原） X57145  0.2ml
Anti-CGB   ADORA3/A3AR(adenosine receptor A3)  腺苷受體A3抗原 X57146  0.2ml
Anti-CGRP    Integrin alpha V  巨噬細(xì)胞來源的趨化因子αV多肽 X57147  0.1ml
Anti-ChAT   phospho-AMPK alpha-1/PRKAA1(Thr198) peptide  磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗原 X57148  0.1ml
Anti-ChRM2   CREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1)  環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白（抗原） X57149  0.1ml
Anti-ChRM3    phospho-CREB-1   磷酸化環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白（多肽） X57150  0.1ml
Anti-CIDE-B   ADRA2 peptide  腎上腺素能受體2抗原 X57151  0.2ml
Anti-C-jun/AP-1    CRF (Corticotropin-Releasing Factor)  促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子 X57152  0.1ml