1.產(chǎn)品名稱：大鼠胚胎成纖維細(xì)胞實驗方法

2.組織來源：胚胎組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

大鼠胚胎成纖維細(xì)胞分離自胚胎；成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的胚胎成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細(xì)胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。該細(xì)胞常用作ES細(xì)胞培養(yǎng)常用的飼養(yǎng)層細(xì)胞，能產(chǎn)生抑制ES細(xì)胞自主分化和促進ES細(xì)胞增殖的因子，故能有效地促進ES細(xì)胞的增殖并維持其未分化特性和多潛能性，且分泌效果優(yōu)于外源添加的一些因子，而且可以為ES細(xì)胞的培養(yǎng)提供類似于體內(nèi)的微環(huán)境，故在研究哺乳動物ES細(xì)胞中得到廣泛使用。

本公司的大鼠胚胎成纖維細(xì)胞采用*-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

5.培養(yǎng)基信息：

DMEM[H]、FBS、成纖維細(xì)胞生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

優(yōu)勢：
1、細(xì)胞株種類齊全，包括腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株，如：人滑膜細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞，人細(xì)胞，人腎近曲小管上皮細(xì)胞，肝癌細(xì)胞，心肌細(xì)胞，子宮內(nèi)膜細(xì)胞等
2、*，專業(yè)的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指導(dǎo)
3、購買本公司的細(xì)胞株，免費復(fù)蘇
4、客戶收到細(xì)胞后一天回傳細(xì)胞圖片，三天回傳細(xì)胞生長狀態(tài)圖片，五天內(nèi)有問題公司負(fù)責(zé)重發(fā)，超過五天時限至一個月內(nèi)重發(fā)細(xì)胞收半價，超過一個月重發(fā)全額收費。
5、經(jīng)濟、實惠、可靠，完善、穩(wěn)定的實驗體系，優(yōu)秀的科研隊伍，*的實驗設(shè)備、準(zhǔn)確可靠的實驗結(jié)果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細(xì)胞株、抗體、血清、培養(yǎng)基、常用生化試劑、耗材。
操作步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
Receptor Accessory Protein (IL1RAP) 96T Y17463 Homo sapiens (Human)
白介素1受體輔助蛋白(IL1RAP)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Interleukin 1 Receptor Accessory Protein (IL1RAP) 96T Y17464 Mus musculus (Mouse)
白介素1受體輔助蛋白(IL1RAP)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Interleukin 1 Receptor Accessory Protein (IL1RAP) 96T Y17465 Rattus norvegicus (Rat)
肝素結(jié)合性表皮生長因子(HBEGF)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Heparin Binding Epidermal Growth Factor Like Growth Factor (HBEGF) 96T Y17466 Mus musculus (Mouse)
肝素結(jié)合性表皮生長因子(HBEGF)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Heparin Binding Epidermal Growth Factor Like Growth Factor (HBEGF) 96T Y17467 Rattus norvegicus (Rat)
肺部激活調(diào)節(jié)趨化因子(PARC)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Pulmonary Activation Regulated Chemokine (PARC) 96T Y17468 Homo sapiens (Human)
絲切蛋白1(CFL1)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Cofilin 1, Non Muscle (CFL1) 96T Y17469 Homo sapiens (Human)
絲切蛋白1(CFL1)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Cofilin 1, Non Muscle (CFL1) 96T Y17470 Mus musculus (Mouse)
絲切蛋白1(CFL1)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Cofilin 1, Non Muscle (CFL1) 96T Y17471 Rattus norvegicus (Rat)
淋巴毒素β(LTβ)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Lymphotoxin Beta (LTb) 96T Y17472 Homo sapiens (Human)
淋巴毒素β(LTβ)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Lymphotoxin Beta (LTb) 96T Y17473 Mus musculus (Mouse)
淋巴毒素β(LTβ)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)
IgG   0.2ml
Anti-Os05g/0477200 protein /FITC  熒光素標(biāo)記抗水稻白葉枯病菌Os05g0477200蛋白抗體IgG   0.2ml
Anti-OTR/FITC  熒光素標(biāo)記*受體抗體IgG   0.2ml
Anti-OVA/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗雞卵白蛋白/卵清蛋白抗體IgG   0.2ml
Anti-ox-LDL/FITC  熒光素標(biāo)記抗氧化低密度脂蛋白抗體IgG   0.2ml
Anti-OXR /FITC  熒光素標(biāo)記整合素樣金屬蛋白酶與*1型-7抗體IgG   0.2ml
Anti-Oxytetracycline/FITC  熒光素標(biāo)記*抗體IgG   0.2ml
Anti-P2P-R/RBBP6 /FITC  熒光素標(biāo)記增殖潛能相關(guān)蛋白抗體IgG   0.2ml
Anti-P2Y1 receptor/FITC  熒光素標(biāo)記P2Y1受體抗體IgG   0.2ml
Anti-P2Y4 receptor/P2ry4 /FITC  熒光素標(biāo)記P2Y4受體抗體IgG   0.2ml
Anti-P14ARF/FITC  熒光素標(biāo)記抑癌基因p14抗體IgG   0.2ml
Anti-P16/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗抑癌基因p16抗體IgG   0.2ml
Anti-P19ARF/FITC  熒光素標(biāo)記p19ARF抑癌基因抗體IgG   0.2ml
Anti-P21/WAF1/CIP1 /FITC  熒光素標(biāo)記p21抗體IgG   0.2ml
Anti-P27/kip1 /FITC  熒光素標(biāo)記P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑IgG   0.2ml
Anti-P27/kip1/Cy3  熒光素Cy3標(biāo)記P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑IgG   0.2ml
Anti-P38 MAPK/FITC  熒光素標(biāo)記絲裂原活化蛋白激酶p38抗體IgG   0.2ml
Anti-P38 MAPK/RBITC  紅色熒光素羅丹明(RBITC)標(biāo)記絲裂原活化蛋白激酶p38抗體IgG   0.2ml
Anti-P-p38 ERK/MAPK14 /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化-絲裂原活化蛋白激酶p38抗體IgG   0.2ml
Anti-MAPKAP Kinase 2/FITC  熒光素標(biāo)記絲裂原活