【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
1.產品名稱：小鼠腎成纖維細胞操作步驟
2.組織來源：腎組織
3.產品規格：5×10^5cells/T25細胞培養瓶
4.細胞簡介：
小鼠腎成纖維細胞分離自腎組織；腎臟是機體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內代謝產物及某些廢物、毒物，同時經重吸收功能保留水份及其他有用物質，如葡萄糖、蛋白質、氨基酸、鈉離子、鉀離子、*等，以調節水、電解質平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內分泌功能，生成腎素、促紅細胞生成素、活性*3、前列腺素、激肽等，又為機體部分內分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機體內環境的穩定，使新陳代謝得以正常進行。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損以及骨創傷的修復有著十分重要的作用。腎成纖維細胞是腎臟結締組織中zui重要的細胞類型，在體外培養中，一般大致成梭形、多角形或不規則形等，為貼壁生長型細胞。剛分離的腎成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。其主要功能有：①組成過濾屏障內壁的重要部分；②在炎癥和致血栓物質的刺激合成必要的生物活性分子；③受損后影響系膜細胞和上皮細胞，進而影響腎臟病變。
本公司的小鼠腎成纖維細胞采用*-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
5.培養基信息：
DMEM[H]、FBS、成纖維細胞生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。
2、培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
優勢：
1、細胞株種類齊全，包括腫瘤細胞、正常細胞、耐藥細胞株，如：人滑膜細胞，人胃癌細胞，人細胞，人腎近曲小管上皮細胞，肝癌細胞，心肌細胞，子宮內膜細胞等
2、*，專業的細胞培養技術指導
3、購買本公司的細胞株，免費復蘇
4、客戶收到細胞后一天回傳細胞圖片，三天回傳細胞生長狀態圖片，五天內有問題公司負責重發，超過五天時限至一個月內重發細胞收半價，超過一個月重發全額收費。
5、經濟、實惠、可靠，完善、穩定的實驗體系，優秀的科研隊伍，*的實驗設備、準確可靠的實驗結果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細胞株、抗體、血清、培養基、常用生化試劑、耗材。
人β葡糖苷酶
人β內酰胺酶
人β甘露糖苷酶
人β半乳糖苷酶
人αL艾杜糖苷酸酶
人α2抗纖溶酶
人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶
人L苯*解氨酶
人5核苷酸酶
人1,3-βD葡葡糖苷酶
人肌酸激酶
人靶向核糖核酸酶
人蛋白激酶C
人醛縮酶
人L-乳酸脫氫酶
人酸性神經鞘磷脂酶
人花生四烯酸5脂加氧酶
人5脂加氧酶
人腺苷酸環化酶1
人可溶性腺苷酸環化酶
人*脫羧酶
人蛋白*激酶
人蛋白*磷酸酶
人腫瘤壞死因子α轉化酶
人多形核白細胞彈性蛋白酶
人*型纖溶酶原激活物
人*8
人*6
人果糖1,6二磷酸醛縮酶
人組織蛋白酶D
人激素敏感性脂肪酶
人*
人烏頭酸酶2
人26S蛋白酶體
人周期素依賴性激酶4
人胎盤堿性磷酸酶
人受體*激酶
Anti-Phospho-CHK2 (Thr68)/FITC 熒光素標記磷酸化細胞周期檢測點激酶2抗體IgG 0.2ml
Anti-Chloramphenicol/FITC 熒光素標記抗*抗體IgG 0.2ml
Anti-ChRM1 /FITC 熒光素標記毒蕈堿型乙酰*受體M1抗體IgG 0.2ml
Anti-ChRM2/FITC 熒光素標記毒蕈堿型乙酰*受體M2抗體IgG 0.2ml
Anti-ChRM2/FITC 熒光素標記毒蕈堿型乙酰*受體M2抗體 IgG 0.2ml
Anti-ChRM3/FITC 熒光素標記毒蕈堿型乙酰*受體M3抗體IgG 0.2ml
anti-CIB1/FITC 熒光素標記鈣-整合素結合蛋白1抗體IgG 0.2ml
Anti-CIDE-B/FITC 熒光素標記促進凋亡基因抗體IgG 0.2ml
Anti-CIDEB/FITC 熒光素標記CIDEB抗體IgG 0.2ml
Anti-C-jun/AP-1 /FITC 熒光素標記原癌基因蛋白/活化蛋白1抗體IgG 0.2ml
Anti-phospho-c-Jun (Ser73) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化原癌基因c-Jun抗體IgG 0.2ml
Anti-CK2/FITC 熒光素標記*激酶2抗體IgG 0.2ml
Anti-CK3/FITC 熒光素標記細胞角蛋白3抗體IgG 0.2ml
Anti-CK4/FITC 熒光素標記細胞角蛋白4抗體IgG 0.2ml
Anti-CK5/FITC 熒光素標記細胞角蛋白5抗體IgG 0.2ml
Anti-PCNA(phosphos Dyr211)/FITC 熒光素標記兔抗人、小鼠、大鼠、牛、兔、羊、雞磷酸化增殖細胞核抗原抗體IgG 0.2ml
Anti-CK5/6 /FITC 熒光素標記細胞角蛋白5/6抗體IgG 0.2ml
Anti-CK7/FITC 熒光素標記細胞角蛋白7抗體IgG 0.2ml
Anti-CK7/FITC 熒光素標記抗細胞角蛋白7抗體(大
