【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
1.產品名稱：小鼠心肌成纖維細胞操作步驟
2.組織來源：心臟組織
3.產品規格：5×10^5cells/T25細胞培養瓶
4.細胞簡介：
小鼠心肌成纖維細胞分離自心臟組織；心臟由心肌細胞和非心肌細胞組成，非心肌細胞占細胞總數的70%，其中90%以上的非心肌細胞由心肌成纖維細胞組成。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的心肌成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。近年來，人們逐漸了解到非心肌細胞不僅對心肌細胞具有結構上的支持、保護作用，而且還具有自分泌和旁分泌功能，影響心肌細胞的結構和生理功能；心肌成纖維細胞主要功能為對心肌細胞起結構支持作用并負責細胞基質外的合成，當心肌損傷時能產生旁分泌生長因子。心肌成纖維細胞是心臟結締組織中zui常見的細胞，可合成和分泌膠原纖維、彈性纖維、網狀纖維及有機基質，并且在外傷等因素刺激下，部分纖維細胞可重新轉變為幼稚的成纖維細胞，其功能活動也得以恢復，參與組織損傷后的修復。因此，對心肌成纖維細胞的生理學研究成為現代心血管領域研究的一個重點。
本公司的小鼠心肌成纖維細胞采用膠原酶-*聯合消化結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
5.培養基信息：
DMEM[H]、FBS、成纖維細胞生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。
2、培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
優勢：
1、細胞株種類齊全，包括腫瘤細胞、正常細胞、耐藥細胞株，如：人滑膜細胞，人胃癌細胞，人細胞，人腎近曲小管上皮細胞，肝癌細胞，心肌細胞，子宮內膜細胞等
2、*，專業的細胞培養技術指導
3、購買本公司的細胞株，免費復蘇
4、客戶收到細胞后一天回傳細胞圖片，三天回傳細胞生長狀態圖片，五天內有問題公司負責重發，超過五天時限至一個月內重發細胞收半價，超過一個月重發全額收費。
5、經濟、實惠、可靠，完善、穩定的實驗體系，優秀的科研隊伍，*的實驗設備、準確可靠的實驗結果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細胞株、抗體、血清、培養基、常用生化試劑、耗材。
人神經膠質纖維酸性蛋白
人15脂加氧酶
人*酯轉移蛋白
人白三烯C4
人*
人脂蛋白脂酶
人糖原磷酸化酶同工酶II
人糖原磷酸化酶同工酶MM
人糖原磷酸化酶同工酶BB
人脂蛋白α
人骨膠原交聯
人Ⅰ型前膠原C末端肽
人脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉
人吡啶交聯物
人骨橋素
人γ氨基丁酸
人P物質受體
人環磷酸鳥苷
人脂蛋白磷脂酶A2
人內皮脂肪酶
人橫紋肌輔肌動蛋白α
人骨成型蛋白7
人25羥基*3
人白三烯B4
人腸脂肪酸結合蛋白
人氧化低密度脂蛋白
人骨髓抑制因子1
人脂聯素
人組胺
人抵抗素
人骨特異性堿性磷酸酶B
人骨鈣素/骨*蛋白
人可溶性核因子κB受體活化因子配基
人1,25二羥基*3
人組蛋白H2b
人骨保護素
人骨成型蛋白受體Ⅱ
人骨成型蛋白受體1A
人骨成型蛋白4
Anti-CD169/Siglec-1/sialoadhesin /FITC 熒光素標記CD169抗體IgG 0.2ml
Anti-CD170/Siglec-5/FITC 熒光素標記唾液酸結合性免疫球蛋白樣凝集素5抗體IgG 0.2ml
Anti-Sialic14/FITC 熒光素標記唾液酸結合性免疫球蛋白樣凝集素14抗體IgG 0.2ml
Anti-CD177/FITC 熒光素標記CD177抗體IgG 0.2ml
Anti-CD184/CXC-R4/FITC 熒光素標記細胞表面趨化因子受體4抗體IgG 0.2ml
Anti-CD226/DNAM-1/FITC 熒光素標記CD226抗體IgG 0.2ml
Anti-CD229/SLAMF3/FITC 熒光素標記CD229抗體IgG 0.2ml
Anti-CD244/NKR2B4/SLAMF4/FITC 熒光素標記CD244抗體IgG 0.2ml
Anti-TNFRSF13B/TNFRSF14B/TACI/FITC 熒光素標記腫瘤壞死因子受體超家族成員13B抗體IgG 0.2ml
Anti-CD272/BTLA/FITC 熒光素標記B和T淋巴細胞衰減蛋白抗體IgG 0.2ml
Anti-Cdc2 p34/FITC 熒光素標記周期素依賴性蛋白激酶p34抗體IgG 0.2ml
Anti-Phospho-cdc2 (Thr14)/FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化周期素依賴激酶1抗體IgG 0.2ml
Anti-Phospho-cdc2 (Tyr15) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化周期素依賴激酶1抗體IgG 0.2ml
Anti-Cdc6/FITC 熒光素標記細胞分裂周期蛋白6抗體IgG 0.2ml
Anti-Phospho-cdc25C (Ser216) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化細胞分裂周期蛋白25抗體IgG 0.2ml
Anti-cdc25A /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠細胞分裂周期蛋白25抗體IgG 0.2ml
Anti-Phospho-cdc25A (Thr506) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化細胞分裂周期蛋白25抗體IgG 0.2ml
