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小鼠胚胎成纖維細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法

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更新時(shí)間：2017-07-27 14:34:12瀏覽次數(shù)：458次

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人正常組織來源細(xì)胞

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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司

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產(chǎn)品簡介

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法售后：收到細(xì)胞后7天，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問題（如污染，死亡，快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí)，應(yīng)出具書面質(zhì)量問題報(bào)告并及時(shí)傳真致銷售人員，我們將盡快為您解決。

詳細(xì)介紹

1.產(chǎn)品名稱：小鼠胚胎成纖維細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法

2.組織來源：胚胎組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞分離自胚胎；成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的胚胎成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。該細(xì)胞常用作ES細(xì)胞培養(yǎng)常用的飼養(yǎng)層細(xì)胞，能產(chǎn)生抑制ES細(xì)胞自主分化和促進(jìn)ES細(xì)胞增殖的因子，故能有效地促進(jìn)ES細(xì)胞的增殖并維持其未分化特性和多潛能性，且分泌效果優(yōu)于外源添加的一些因子，而且可以為ES細(xì)胞的培養(yǎng)提供類似于體內(nèi)的微環(huán)境，故在研究哺乳動(dòng)物ES細(xì)胞中得到廣泛使用。

本公司的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞采用*-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

5.培養(yǎng)基信息：

DMEM[H]、FBS、成纖維細(xì)胞生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

細(xì)胞名稱	小鼠胚胎成纖維細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法
規(guī)格	5×10^5cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
價(jià)格	來電可享受優(yōu)惠

優(yōu)勢(shì)：
1、細(xì)胞株種類齊全，包括腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株，如：人滑膜細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞，人細(xì)胞，人腎近曲小管上皮細(xì)胞，肝癌細(xì)胞，心肌細(xì)胞，子宮內(nèi)膜細(xì)胞等
2、*，專業(yè)的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指導(dǎo)
3、購買本公司的細(xì)胞株，免費(fèi)復(fù)蘇
4、客戶收到細(xì)胞后一天回傳細(xì)胞圖片，三天回傳細(xì)胞生長狀態(tài)圖片，五天內(nèi)有問題公司負(fù)責(zé)重發(fā)，超過五天時(shí)限至一個(gè)月內(nèi)重發(fā)細(xì)胞收半價(jià)，超過一個(gè)月重發(fā)全額收費(fèi)。
5、經(jīng)濟(jì)、實(shí)惠、可靠，完善、穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)體系，優(yōu)秀的科研隊(duì)伍，*的實(shí)驗(yàn)設(shè)備、準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細(xì)胞株、抗體、血清、培養(yǎng)基、常用生化試劑、耗材。
操作步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽*儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲(chǔ)存。-20℃不可超過1小時(shí)，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
兔骨形成蛋白
人干擾素調(diào)節(jié)因子
鯉魚卵黃蛋白原
小鼠CD3分子
魚類*釋放激素
兔骨保護(hù)素
小鼠小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3
人淋巴毒素β
大鼠胞漿型磷脂酶A2
人淋巴毒素α
魚類三碘甲狀腺原氨酸
兔胰淀素
小鼠小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體2
大鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽
大鼠肌鈣蛋白T
兔心肌肌鈣蛋白Ⅰ
小鼠小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1
人CC趨化因子受體1
魚類*
大鼠CD8分子
人CX3C趨化因子受體1
魚類超敏C反應(yīng)蛋白
兔核因子κB受體活化因子配基
小鼠高鐵血紅蛋白
兔乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白
魚骨鈣素/骨*蛋白
大鼠表皮生長因子受體
小鼠骨退化特異標(biāo)志物
小鼠Ⅰ型膠原C端肽
大鼠白介素2可溶性受體
紅螯光殼螯蝦卵黃脂磷蛋白/卵黃磷蛋白
兔心肌特異性肌鈣蛋白T
人黏膜地址素細(xì)胞黏附分子
兔*
人β干擾素
羅氏沼蝦諾達(dá)病毒
小鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞髓鞘糖蛋白抗體
大鼠軸突生長誘向因子1
毒蛇因子
小鼠粘蛋白/粘液素5B
兔子催乳素
大鼠乳酸脫氫酶
人可溶性CD38
人可溶性CD21
ENA-78/CXCL5(Mouse Epithelial neutrophil activating peptide 78) ELISA Kit 小鼠上皮中性粒細(xì)胞活化肽78   48T
OLAb(Mouse oxidized lowdensity lipoprotein antibody) ELISA KIT 小鼠氧化低密度脂蛋白抗體   48T
ASMA(Mouse Anti-Smooth Muscle Antibody) ELISA Kit 小鼠抗平滑肌抗體   48T
M30(Mouse Embryonic Stem MESPU30) ELISA Kit 小鼠胚胎干細(xì)胞系MESPU30   48T
NF-κB p65(Mouse nuclear factor-κB p65) ELISA Kit 小鼠核因子κB亞基p65親和肽   48T
GP- II b III a/CD41+CD61(Mouse plaet membrane glycoprotein II b III a) ELISA Kit 小鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa   48T
FFA(Mouse free fatty acids) ELISA Kit 小鼠游離脂肪酸   48T
TSP-1(Mouse thrombospondin 1) ELISA Kit 小鼠血小板反應(yīng)蛋白/*敏感蛋白1   48T
ON(Mouse osteonectin) ELISA Kit 小鼠骨粘連蛋白   48T
FA(Mouse Folic acid) ELISA Kit 小鼠*   48T
histon-H2b(Mouse histon-H2b) ELISA Kit 小鼠組蛋白H2b   48T
VCAM-1/CD106(Mouse Vascuolar cell adhesion molecule 1) ELISA Kit 小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1   48T
GR(Mouse glucocorticoid receptor) ELISA Kit 小鼠糖皮質(zhì)類固醇受體   48T
LHRH(Mouse Luteinizing Hormone-Releasing Hormone) ELISA Kit 小鼠黃體生成素釋放激素   48T
NGB(Mouse Neuroglobin) ELISA Kit 小鼠腦紅蛋白   48T
8-iso-PG(Mouse 8-iso prostaglandin) ELISA Kit 小鼠8異前列腺素   48T
IFI16/p16(Mouse interferon-inducible protein 16) ELISA Kit 小鼠γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16/p16   48T
SDF-1a/CXCL12(Mouse Stromal cell derived factor 1a) ELISA Kit 小鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1a