【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
1.產品名稱：小鼠表皮成纖維細胞操作步驟
2.組織來源：皮膚組織
3.產品規格：5×10^5cells/T25細胞培養瓶
4.細胞簡介：
小鼠表皮成纖維細胞分離自皮膚組織；表皮位于動物皮膚的外層，由胚胎時期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結構，由復層扁平上皮構成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質層。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
本公司的小鼠表皮成纖維細胞采用先*消化、后*-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
5.培養基信息：
DMEM[H]、FBS、成纖維細胞生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。
2、培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
優勢：
1、細胞株種類齊全，包括腫瘤細胞、正常細胞、耐藥細胞株，如：人滑膜細胞，人胃癌細胞，人細胞，人腎近曲小管上皮細胞，肝癌細胞，心肌細胞，子宮內膜細胞等
2、*，專業的細胞培養技術指導
3、購買本公司的細胞株，免費復蘇
4、客戶收到細胞后一天回傳細胞圖片，三天回傳細胞生長狀態圖片，五天內有問題公司負責重發，超過五天時限至一個月內重發細胞收半價，超過一個月重發全額收費。
5、經濟、實惠、可靠，完善、穩定的實驗體系，優秀的科研隊伍，*的實驗設備、準確可靠的實驗結果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細胞株、抗體、血清、培養基、常用生化試劑、耗材。
血管內皮生長因子C型抗原
血管內皮生長因子受體2
可溶性血管內皮生長因子受體2
血管內皮細胞生長因子受體-3（多肽）
血管內皮細胞生長因子受體-3抗原
血管假性血友病因子/血管性血友病因子抗原
信號通路Wnt1抗原
包含氧化還原酶的WW域抗原
X-連鎖凋亡蛋白/性連鎖凋亡抑制蛋白抗原
XIAP相關因子1凋亡抑制蛋白抗原
X射線修復交叉互補蛋白/細胞堿基切除修復基因抗原
胞質緊密粘連蛋白1抗原
ARC(多肽抗原)
血管緊張素Ⅱ受體(抗原)
蛋白激酶C（多肽抗原）
腎上腺素能受體β1(抗原)
膜粘連蛋白-5(抗原)
水通道蛋白-4（抗原）
B7-H4（抗原）
BADH2抗原
骨鈣素(抗原)
鈣激活鉀通道蛋白
BTG2（抗原）
原癌基因蛋白（活化蛋白1）（抗原）
周期素D1（抗原）
β-酪蛋白(抗原)
膽囊收縮素/縮膽囊素(八肽)
CD4(抗原)
CD4抗原
CD8抗原
CD20（抗原）
CD25/白介素2-受體(抗原)
血小板內皮細胞黏附分子-1（抗原）
CD34(多肽抗原)
神經細胞粘附分子1(抗原)
癌胚抗原相關細胞粘附分子8
CD68抗原
干細胞生長因子受體/細胞表面分化抗原（抗原）
造血干細胞抗原（多肽抗原）
CD147(抗原)
G-CSF ELISA Kit 大鼠粒細胞集落刺激因子 48T
NAP-2/CXCL7 ELISA Kit 大鼠中性粒細胞趨化蛋白2 48T
Flt3 ELISA Kit 大鼠FMS樣*激酶3 48T
Flt3L ELISA Kit 大鼠FMS樣*激酶3配體 48T
bFGF-9 ELISA Kit 大鼠堿性成纖維細胞生長因子9 48T
bFGF-4 ELISA Kit 大鼠堿性成纖維細胞生長因子4 48T
bFGF-6 ELISA Kit 大鼠堿性成纖維細胞生長因子6 48T
aFGF-1 ELISA Kit 大鼠酸性成纖維細胞生長因子1 48T
FASL ELISA Kit 大鼠凋亡相關因子配體 48T
FAS/CD95 ELISA Kit 大鼠凋亡相關因子 48T
EPO ELISA Kit 大鼠紅細胞生成素 48T
EPOR ELISA Kit 大鼠紅細胞生成素受體 48T
Eotaxin 1/CCL11 ELISA Kit 大鼠嗜酸粒細胞趨化蛋白Eotaxin 1 48T
ECF ELISA Kit 大鼠嗜酸粒細胞趨化因子 48T
EG-VEGF ELISA Kit 大鼠內分泌腺來源的血管內皮生長因子 48T
1,3- BetaD-Glu ELISA Kit 大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶 48T
CD30 ELISA Kit 大鼠CD30分子 48T
E-Cad ELISA Kit 大鼠E鈣黏蛋白/上皮鈣黏蛋白 48T
BTC ELISA Kit 大鼠β細胞素 48T
ANG-2 ELISA Kit 大鼠血管生成素2 48T
ANG-1 ELISA Kit 大鼠血管生成素1 48T
