【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
1.產(chǎn)品名稱：兔肺大動脈平滑肌細胞操作步驟
2.組織來源：肺動脈組織
3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
4.細胞簡介：
兔肺大動脈平滑肌細胞分離自肺大動脈組織；肺大動脈亦稱肺動脈干。在呼吸空氣的脊椎動物中，把靜脈血由心臟導向肺臟的動脈。肺大動脈起于右心室，在主動脈之前向左上后方斜行，在主動脈弓下方分為左、右肺動脈，經(jīng)肺門入肺。肺動脈干位于心包內(nèi)，為一粗短的動脈干。起自右心室，在升主動脈前方向左后上方斜行，至主動脈弓下方分為左、右肺動脈。左肺動脈較短，在左主支氣管前方橫行，分二支進入左肺上、下葉。右肺動脈較長而粗，經(jīng)升主動脈和上腔靜脈后方向右橫行，至右肺門處分為三支進入右肺上、中、下葉。肺大動脈平滑肌細胞是肺血管的重要結構細胞之一，在調(diào)控肺血管的收縮和舒張功能中有重要作用。肺大動脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。肺大動脈平滑肌細胞的異常是肺動脈高壓發(fā)生發(fā)展的重要病理學特征，其凋亡和增殖失衡是肺血管重塑的關鍵。研究表明，急性和慢性缺氧均可導致肺動脈高壓，即缺氧性肺動脈高壓，推斷缺氧可能是通過促進肺大動脈平滑肌細胞的增殖而參與缺氧性肺動脈高壓的發(fā)生發(fā)展。肺大動脈平滑肌細胞主要功能：①細胞表面表達介質(zhì)（ICAM-1和VCAM-1）參與血管壁炎癥反應；②是多數(shù)重要動脈疾病的靶細胞。肺大動脈平滑肌細胞與主要病生理變化：①平滑肌增生易致肺動脈高壓；②先天性肺動脈狹窄；③肺動脈栓塞。
本公司的兔肺大動脈平滑肌細胞采用*-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經(jīng)alpha-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
5.培養(yǎng)基信息：
DMEM[H]、FBS、平滑肌細胞生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
優(yōu)勢：
1、細胞株種類齊全，包括腫瘤細胞、正常細胞、耐藥細胞株，如：人滑膜細胞，人胃癌細胞，人細胞，人腎近曲小管上皮細胞，肝癌細胞，心肌細胞，子宮內(nèi)膜細胞等
2、*，專業(yè)的細胞培養(yǎng)技術指導
3、購買本公司的細胞株，免費復蘇
4、客戶收到細胞后一天回傳細胞圖片，三天回傳細胞生長狀態(tài)圖片，五天內(nèi)有問題公司負責重發(fā)，超過五天時限至一個月內(nèi)重發(fā)細胞收半價，超過一個月重發(fā)全額收費。
5、經(jīng)濟、實惠、可靠，完善、穩(wěn)定的實驗體系，優(yōu)秀的科研隊伍，*的實驗設備、準確可靠的實驗結果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細胞株、抗體、血清、培養(yǎng)基、常用生化試劑、耗材。
Cy5標記的兔抗牛IgM GRM2/GLUR2 (Glutamate Receptor Metabotropic 2)
Cy5.5標記的兔抗牛IgM GRO Alpha/GRO/MGSA/CXCL1 protein (growthregulated oncogene Alpha)
Cy7標記的兔抗牛IgM GRP78(glucose regulated protein 78)
*標記的兔抗牛IgM GSR/GRase(glutathione reductase)
膠體金標記的兔抗牛IgM A/H1N1-M2 Human(Avian influenza Matrix Protein-2 Human)
Alexa Fluor 488標記的兔抗牛IgM A/H1N1-M2 Swine(Avian influenza Matrix Protein-2 Swine)
Alexa Fluor 555標記的兔抗牛IgM H1N1(Influenza A virus ,hemagglutinin)
堿性磷酸酶（AP）標記的兔抗牛IgM H1N1(Influenza A virus ,hemagglutinin)
羅丹明標記的兔抗雞IgG H2AX peptide
膠體金標記的兔抗雞IgG H1N1(Influenza A virus ,hemagglutinin)
Alexa Fluor 555標記的兔抗雞IgG H1N1(Influenza A virus ,hemagglutinin)
堿性磷酸酶（AP）標記的兔抗雞IgG Haase(hyaluronidase)
*標記的兔抗雞IgG HA tag
Cy3標記的兔抗雞IgG HA tag(map)
Cy5標記的兔抗雞IgG HAI-1(Hepatocyte Growth Factor Activator Inhibitor 1)
Cy5.5標記的兔抗雞IgG HBA1(hemoglobin alpha 1)
Cy7標記的兔抗雞IgG VWCE/URG11(von Willebrand factor C and EGF domain-containing)
PE標記的兔抗雞IgG URGCP/URG4(Up-regulator of cell proliferation)
PE-Cy3標記的兔抗雞IgG URGCP/URG4(Up-regulator of cell proliferation)C terminal
PE-CY5標記的兔抗雞IgG Alpha-HCG(Human chorionic gonadotropin Alpha )
APC標記的兔抗雞IgG HCFHrp/BTA(Bladdertumor antigen)human
advanced glycosylation end products) ELISA Kit 人腎小球組織糖基化終末產(chǎn)物 48T
UP(Human Proteinuria) ELISA Kit 人尿蛋白 48T
LMP7/PSMB99Human low molecular-weight protein/proteasome beta-type subunit) ELISA Kit 人低分子質(zhì)量蛋白7/β型蛋白酶體9 48T
Alpha2-MG(Human Alpha2 macroglobulin) ELISA Kit 人α2巨球蛋白 48T
Kim-1(Human Kidney injury molecule 1) ELISA Kit 人腎損傷分子1 48T
AQP-5(Human Aquaporin 5) ELISA Kit 人水通道蛋白5 48T
AQP-4(Human Aquaporin 4) ELISA Kit 人水通道蛋白4 48T
AQP-3(Human Aquaporin 3) ELISA Kit 人水通道蛋白3 48T
AQP-2(Human Aquaporin 2) ELISA Kit 人水通道蛋白2 48T
AQP-1(Human Aquaporin 1) ELISA Kit 人水通道蛋白1 48T
AQP-0(Human Aquaporin 0) ELISA Kit 人水通道蛋白0 48T
RF(Human rheumatoid factor) ELISA Kit 人類風濕因子 48T
ASO(Human anti-streptolysin O) ELISA Kit 人抗鏈球菌溶血素O/抗O 48T
ACA(Human adrenal cortex antibody) ELISA Kit 人腎上腺皮質(zhì)抗體 48T
GBM(Human glomerular basement membrane antibogy) ELISA Kit 人抗腎小球基底膜抗體 48T
BMG/ Beta2-MG(Human Beta2-microglobulin) ELISA Kit 人β2微球蛋白 48T
ANX- V (Human Annexin V ) ELISA Kit 人膜聯(lián)蛋白Ⅴ 48T
TBM(Human tubular basement membrane antibogy) ELISA Kit 人抗腎小管基底膜抗體 48T
AP13(Human apelin 13) ELISA Kit 人apelin 13 48T
