【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
1.產品名稱：兔骨內膜間充質干細胞操作步驟
2.組織來源：股骨、脛骨組織
3.產品規格：5×10^5cells/T25細胞培養瓶
4.細胞簡介：
兔骨內膜間充質干細胞分離自股骨、脛骨；骨內膜是一層致密結締組織膜，覆蓋在骨的表面（關節面除外），新鮮骨內膜呈粉紅色，含有豐富的血管、神經和成骨細胞。此外，附著于骨的肌腱、韌帶于附著部位都與骨內膜編織在一起。因而骨內膜與骨質結合甚為牢固。骨內膜富含血管、神經，通過骨質的滋養孔分布于骨質和骨髓。骨內膜分內、外兩層，外層主要是粗大的膠原纖維束，部分纖維穿入骨質，使骨內膜固定于骨面；內層疏松，含成骨細胞和破骨細胞（分別具有產生新骨質和改建骨的功能）。骨髓腔和骨松質的網眼也襯著一層菲薄的結締組織膜，叫做骨膜。骨內膜的內層和骨膜有分化成骨細胞和破骨細胞的能力，以形成新骨質和破壞、改造已生成的骨質，所以對骨的發生、生長、修復等具有重要意義。骨內膜間充質干細胞是一種具有高度自我更新能力和多向分化潛能的干細胞，可以向骨、軟骨、肌組織、皮膚、脂肪、神經等多種組織分化，因此可以作為組織工程中的種子細胞。骨內膜間充質干細胞的體外培養條件要求較高，在培養過程中，受貼壁時間、種植密度、血清含量、培養溫度和培養基pH值等條件的影響。
本公司的兔骨內膜間充質干細胞采用沖洗骨髓、消化骨內膜、差速貼壁法結合培養基篩選制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經CD90/CD44、CD34/CD45免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
5.培養基信息：
DMEM-F12、FBS、間充質干細胞生長添加劑、Glutamine、Penicillin、Streptomycin等
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。
2、培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
優勢：
1、細胞株種類齊全，包括腫瘤細胞、正常細胞、耐藥細胞株，如：人滑膜細胞，人胃癌細胞，人細胞，人腎近曲小管上皮細胞，肝癌細胞，心肌細胞，子宮內膜細胞等
2、*，專業的細胞培養技術指導
3、購買本公司的細胞株，免費復蘇
4、客戶收到細胞后一天回傳細胞圖片，三天回傳細胞生長狀態圖片，五天內有問題公司負責重發，超過五天時限至一個月內重發細胞收半價，超過一個月重發全額收費。
5、經濟、實惠、可靠，完善、穩定的實驗體系，優秀的科研隊伍，*的實驗設備、準確可靠的實驗結果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細胞株、抗體、血清、培養基、常用生化試劑、耗材。
堿性磷酸酶（AP）標記的小鼠抗牛IgG ECE1(Endothelin Converting Enzyme 1)
膠體金標記的小鼠抗牛IgG ECE2(Endothelin Converting Enzyme 2)
Cy3標記的小鼠抗牛IgG ECP(eosinophil cationic protein)mouse rat
辣根過氧化物酶標記的小鼠抗牛IgG ED-1 (Ectodermal Dysplasia 1)
*標記的小鼠抗牛IgG EGFL7(EGF-like domain containing protein 7)
*標記的小鼠抗豚鼠IgG Egr-1(Early growth response 1)
膠體金標記的小鼠抗豚鼠IgG phospho-eIF4E(pSer209)(phospho-Eukaryotic translation initiation factor 4E)
辣根過氧化物酶標記的小鼠抗豚鼠IgG ELK1
PE-CY5標記的小鼠抗豚鼠IgG Elastin
APC標記的小鼠抗豚鼠IgG ELAVL1/HuR peptide
Alexa Fluor 350標記的小鼠抗豚鼠IgG Emp1 (epithelial membrane protein 1)
Alexa Fluor 488標記的小鼠抗豚鼠IgG sFRP-4(Secreted frizzled-related protein 4; Frizzled protein, human endometrium)
Alexa Fluor 555標記的小鼠抗豚鼠IgG Endostatin
Alexa Fluor 647標記的小鼠抗豚鼠IgG E.coli O6 (Escherichia coli O6)
PE-Cy5.5標記的小鼠抗豚鼠IgG EPEC/E.coli(enteropathogenic E．coli，EPEC)
堿性磷酸酶（AP）標記的小鼠抗豚鼠IgG EphA1 R(Ephrin A1 Receptor)
FITC標記的小鼠抗豚鼠IgG EPOR peptide
Cy3標記的小鼠抗豚鼠IgG phospho-ERK1/MAPK-1/2(pThr183 + pTyr185)
Cy5標記的小鼠抗豚鼠IgG ERK(Extracellular signal-regulated kinase)
Cy5.5標記的小鼠GSTs(Human glutathione S-transferases) ELISA Kit 人*S轉移酶 48T
DUB(Human deubiquitinating enzyme) ELISA Kit 人泛素分解酶 48T
sPLA2(Human secreted phospholipase A2) ELISA Kit 人分泌型磷脂酶A2 48T
E3/UBPL(Human E3/ubiquitin-protein ligase) ELISA Kit 人泛素連接酶 48T
MCT(Human mast cell tryptase) ELISA Kit 人肥大細胞類* 48T
DT(Human dopachrome tautomerase) ELISA Kit 人多巴色素異構酶 48T
E2/UBCE(Human E2/ubiquitin-conjugating enzyme) ELISA Kit 人泛素結合酶 48T
PDI(Human protein disulfide isomerase) ELISA Kit 人蛋白質二硫鍵異構酶 48T
CAD(Human caspase activated deoxyribonuclease0 ELISA Kit 人胱天蛋白酶激活的脫氧核糖核酸酶 48T
Gamma-ECS(Human Gamma-glutamyl systeine synthetase) ELISA Kit 人γ谷氨酰半*合成酶 48T
E1/UBAE(Human E1/ubiquitin-activating enzyme) ELISA Kit 人泛素激活酶 48T
PP(Human Pepsin) ELISA Kit 人* 48T
HK(Human Hexokinase) ELISA Kit 人己糖激酶 48T
PDH E1(Human pyruvate dehydrogenase-E1) ELISA Kit 人丙酮酸脫氫酶E1 48T
GSK(Human glycogen synthase kinase) ELISA Kit 人糖原合成酶激酶 48T
Casp-9(Human Caspase-9) ELISA Kit 人胱天蛋白酶9 48T
Casp-3(Human Caspase 3) ELISA Kit 人胱天蛋白酶3 48T
NE(Human neutrophil elastase) ELISA Kit 人中
抗豚鼠IgG MAPK1/ERK3 (Mitogen-activated protein kinase 3; P44MAPK)
